ブランティングコンビニエンスキット
Blunting-Convenience Kit
- 製造元 :
- (株)ニッポンジーン
- 保存条件 :
- 冷凍 (ドライアイス輸送)
- 構造式
- ラベル
- 荷姿
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比較
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製品コード
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容量
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価格
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在庫
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25回用
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ドキュメント
- スペクトルデータ
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- 検査成績書
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- 校正証明書
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製品概要
Blunting-Convenience Kit はDNA 末端の平滑化とライゲーション反応を簡単、迅速に行うことができるキットです。T4 DNA Polymerase はPolymerase 活性と3′→ 5′Exonuclease 活性を持ち、DNA 末端を効率よく平滑化することができます。また、ライゲーション試薬の2 x Ligation Mix はLigation-Convenience Kit と同じものであり、平滑末端ライゲーション反応も16°C、5 ～ 30 分間で効率よく行うことができます。
特長
- 短時間（37°C、5 分間）で高効率なDNA 平滑化が可能（DNA末端形状かかわらず）
- 短時間（16°C、5～30 分間）で高効率な平滑末端ライゲーションが可能
- ライゲーション反応終了液をそのまま形質転換に使用可能
- 平滑化反応、ライゲーション反応共に、標準反応スケールは20 µl
融解方法の注意
- 失活を避けるため、T4 DNA Polymerase は絶対にボルテックスしないでください。
- 2 x Ligation Mix は、使用時に氷上にて完全に融解させ、ピペッティングでよく混ぜてから使用して下さい。
- 2 x Ligation Mix は、50 回までの凍結融解による反応効率の低下は認められておりません。
使用例
プロトコール
（1） 平滑化反応液の調製
5’突出末端、3’突出末端及びPCR 産物など、末端を平滑化したいDNA（DNA 末端濃度で0.1～10 pmol)を17 µlに調製する。次に、10 x Blunting Buffer を2 µl 加え混合する。
平滑化反応（37℃、5~30分間）
| DNA サンプル | 17 μl |
| 10×Blunting Buffer | 2 μl |
| T4 DNA Polymerase | 1 μl |
| Total | 20 μl |
（2） 酵素の添加
T4 DNA Polymerase を1 µl 加え、ピペッティングで混合する。
（3） 平滑化反応
37°Cで5 分間反応させる。
（4） 反応の停止
平滑化反応液を氷中に置き反応を停止する。すぐに使用しない場合はフェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール抽出、エタノール沈澱を行い－20°Cで保存する。
（5） ライゲーション反応液の調製
平滑化反応液、平滑末端DNA ベクター溶液を合わせて10 µl のDNA 溶液を調製する。10 µl の2 x Ligation Mix を添加し、混和する。
ライゲーション反応（16℃、5~30分間）
| 平滑化DNAサンプル | 10 μl |
| 2×Ligation Mix | 10 μl |
| Total | 20 μl |
（6） ライゲーション反応
16°Cで5～30 分間反応させる。
（7） 形質転換
反応液をそのまま形質転換に用いる。
実験例1 ベクター平滑化の有無による形質転換効率の比較
EcoR l （5′末端突出）とPst l （3′末端突出）でDouble digestion したpUC19 DNA について、本キットを用いて平滑化（37°C、5 分間）、ライゲーション（16°C、30 分間）を行い、大腸菌の形質転換を行った。未切断のpUC19 DNA によって得られる形質転換効率を１として、平滑化あり、なしの場合の形質転換効率を相対値でグラフに示した。
結果
本キットによって、制限酵素処理されたpUC19 DNA が平滑化され、さらに平滑末端ライゲーションされたことが確認できた。
※その他にも「インサートDNAの平滑化」や、参考データとして「PCR産物の平滑化」のデータを公開しています。詳しくは製品マニュアルをご覧ください。
概要・使用例
| 概要 | Blunting-Convenience Kit はDNA 末端の平滑化とライゲーション反応を迅速・簡単に行うことができるキットです。キットに採用しているT4 DNA Polymerase は、5'→3'Polymerase 活性と3'→5'Exonuclease 活性を持つため、DNA 末端を効率よく平滑化することができます。また、ライゲーション反応では「Ligation-Convenience Kit 」と同じ2 ×LigationMix を使用しておりますので、ライゲーション反応は5 ～30 分間で完了します。【特 長】●平滑化からライゲーションまでを簡便化。●５'突出末端、３'突出末端での条件検討が不要。●短時間で高効率（最短10 分間）。 平滑化反応5 分間 ライゲーション反応5 ～30 分間●反応終了液はそのまま形質転換に使用可能。●低コスト。 WAKO BIO WINDOW No.68,p17(2005.JUN.)。 |
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物性情報
「物性情報」は参考情報でございます。規格値を除き、この製品の性能を保証するものではございません。
本製品の品質及び性能については、本品の製品規格書をご確認ください。
なお目的のご研究に対しましては、予備検討を行う事をお勧めします。
製造元情報
別名一覧
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- 掲載されている製品について
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- 【医薬品原料】
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