Genovis社 ヒトIgGプロテアーゼ「FabRICATOR® Xtra」
Genovis社は、抗体医薬研究用のバイオ医薬プロセス酵素SmartEnzymes™を開発・製造しているスウェーデン(ルンド)のメーカーで、モノクローナル抗体、ADCs(antibody drug conjugates)、Fc融合タンパク質、バイオシミラー等のバイオ医薬品の研究開発に使用できるユニークな酵素(プロテアーゼ、グリコシラーゼ)、試薬キットをラインアップしています。
FabRICATOR® Xtra LALAはヒトIgGのヒンジ領域下部を認識するプロテアーゼで、F(ab')2とFcの調製に最適なIgGプロテアーゼです。
特長
- LALA変異などの変異ヒンジ領域に活性
- ヒトIgGのヒンジ領域下部を特異的に切断
- 1時間でインタクトなF(ab’)2およびFcフラグメントを調製
FabRICATOR® Xtra LALAのワークフロー
FabRICATOR® Xtra LALAは、ヒトIgGのヒンジ領域下部(primary: CPAPEAAG / GPSVF, secondary: CPAPEAA / GGPSVF)でヒトIgGを消化し、インタクトなF(ab’)2およびFcフラグメントを生成します。最適な活性条件は37°C、pH7.4です。
ヒンジ変異型IgGフによる推奨反応条件と消化部位の比較
| Antibody | Enzyme Amount | Reaction Time | Digestion Site(s) |
|---|---|---|---|
| hlgG1-LALA (L234A, L235A) |
1 unit / µg IgG | 1 h | CPAPEAAG/GPSVF (primary), CPAPEAA / GGPSVF (secondary) |
| hlgG4-FALA (F234A, L235A) |
1 unit / µg IgG | 1 h | CPAPEAA/GGPSVF (primary), CPAPEAAG/ GPSVF (secondary) |
| hlgG1-LAGA (L235A, G237A) |
2 units / µg IgG | 2 h | CPAPELA/GAPSVF (primary), CPAPELAG / APSVF (secondary) |
| hlgG1-FES (L234F, L235E, P331S) |
3 units / µg IgG | O/N | CPAPEFEG/GPSVF |
アプリケーションデータ
IgG4型二重特異性抗体における鎖ペアリングバリアントの解析
ヒトIgG4型二重特異抗体のサブユニット分析
二重特異性抗体である talquetamab（hIgG4-FALA）をFabRICATOR® Xtra LALA（ 1ユニットは1µgのIgG1、PBS、37℃）で1時間消化して、逆相LC-MS分析を実施した。scFcおよびF(ab‘)2フラグメントはクロマトグラフィーにより分離され（上段）、F(ab’)2サブユニットの分解スペクトル（下段）は、重鎖および軽鎖の両方に関してbsAbが正しく組み立てられていることを示している。オレンジ色の矢印は、軽鎖のペアリングバリアントが検出される質量を示しており、その存在しないことがさらに示されている。星印は、抗体重鎖の一方または両方が236残基以降で消化されているに対応する。
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