単層膜形成用の無血清培地

オリエンタル酵母 Caco-2細胞単層膜形成用培地

オリエンタル酵母工業株式会社
Caco-2細胞の単層膜形成用の無血清培地

ヒト結腸癌由来細胞(Caco-2)は、過密培養により腸管上皮様に分化することが知られており、小腸における腸管機能を再現した細胞モデルとして、創薬研究分野などで広く利用されています。
本製品はCaco-2細胞の単層膜形成用の無血清培地で、これまで約3週間要していた単層膜形成期間を約5日に短縮可能です。毒劇物非該当品のため、管理・取扱いが容易です。

*本品はCaco-2細胞の播種(プレーティング)・増殖にはご使用頂けませんので、カルチャーインサート等への細胞播種には増殖用培地をお使い下さい。

基礎データ(参考培養例)

基礎データ(参考培養例)

Caco-2細胞を24ウェルプレートのカルチャーインサートに2x105 cellsで播種し(day0)翌日(day1)、本製品(単層膜形成培地)に培地交換した。
以降、本製品で1~2日に1回培地交換を行い、膜抵抗値の変化を測定した。

腸管吸収試験

本製品にて形成させた単層膜を用いてインサートA側から薬剤の吸収試験を行い、B側培地をHPLC分析することで吸収を評価した。透過係数は以下の式にて算出した。

透過係数(cm/sec)
腸管吸収試験
薬剤 用途 透過係数(cm/s) FDAによる透過性評価
Propranolol 不整脈、高血圧、心筋梗塞、緑内障、片頭痛の治療薬 8.7 × 10-6 High
Ketoprofen 経皮鎮痛消炎剤 5.6 × 10-6 High
Atenolol 狭心症治療 3.0 × 10-7 Low

※ 本製品にて形成された単層膜にてトランスポーター(P-gp、BCRP)発現をRT-PCRで確認しております。
※ 本製品にて形成された単層膜は Lucifer Yellow が透過しないことを確認しております。

必要な試薬・器具・機器

  • Caco-2細胞単層膜形成用培地(#47338000)
  • Caco-2 細胞
  • Caco-2 細胞増殖用培地(EMEM + 10% FCS + 100 U/mL ペニシリン + 100 μg/mL ストレプトマイシン 等)
  • フラスコ(75 cm2 フラスコ等)
  • 細胞剥離剤(トリプシン/EDTA等)
  • PBS(-)
  • CO2 インキュベーター(温度:37℃、CO2 濃度:5%)
  • 電気抵抗値測定器
  • セルカルチャーインサート
  • マルチウェルプレート

参考文献

  1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2022 Sep, Article ID 4139812, 9 pages
  2. J Basic Clin Pharm. 2010 Mar;1(2):63-9.
  3. Br J Pharmacol. 2012 Apr;165(8):2598-610.

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セルカルチャーインサート用プレート

セルカルチャーインサート

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