Polysciences社 mRNA精製ビーズ

下記プロトコールは約100µgのTotal RNAから1-2μgのポリアデニルRNAを精製した例となります。本製品(2mL)は1-2μgのmRNAを約20回精製することができます。
操作時間は約15分です。

1. ① 本製品100µLをヌクレアーゼフリーのマイクロチューブ内に加えます。マグネティックセパレーターを使い、30秒間マイクロチューブ内の側面に引き寄せ、上清を除きます。Binding Buffer200µLをマイクロチューブに加えて本製品を洗浄し、上清を除きます。再度Binding Bufferを加え再懸濁させます。
2. ② Total RNAを含むサンプルをDEPC処理水に加え、全体が90µLになるように調整します。
3. ③ RNAの二次構造を解くためにRNAサンプルを55℃で5分間インキュベートします。
4. ④ RNAサンプルに10µLの5M NaClを加えます。（最終濃度：0.5M NaCl）
5. ⑤ RNAサンプルを①の溶液に加え、室温で3分間静置します。
6. ⑥ マグネティックセパレーターを使い、100µLのWash Bufferで2回洗浄します。
7. ⑦ 55℃のDEPC処理水(25-50µL)内に⑥を加え、2分間磁気ビーズに結合したmRNAを溶出します。この操作で90％のmRNAが溶出されます。
8. ⑧ マグネティックセパレーターを使い、新しいヌクレアーゼフリーのマイクロチューブへ⑦を移します。
9. ⑨ ⑧の操作をさらに2回行い、完全にmRNAを溶出します。溶出した溶液は⑧のマイクとチューブに加えます。