O型糖鎖修飾タンパク質、ペプチドの精製用スピンカラム
Genovis社 GlycOCATCH™
Genovis社は、モノクローナル抗体、ADCs(antibody drug conjugates)、Fc融合タンパク質、バイオシミラー等のバイオ医薬品の研究開発に使用できるユニークな酵素(プロテアーゼ、グリコシラーゼ、シアリダーゼなど)や、試薬キットをラインアップしています。
GlycOCATCH™ レジンはO型糖鎖タンパク質/ペプチドに特異的に結合するよう設計された不活性型OpeRATOR™をベースとしたスピンカラム製品で、スピンカラム1本で50ugのムチン型O型糖鎖タンパク質を結合させることができます。シアル酸を除去するためのSialEXO™と溶出方法のオプションとしてのOpeRATOR™酵素が添付されています(8M尿素による溶出も可能)。
*不活性型OpeRATOR™はO型糖鎖に結合しますがタンパク質・ペプチドの切断はしません
特長
- O型糖鎖修飾タンパク質、ペプチドの濃縮
- スピンカラムでの簡便操作(0.5~2時間で結合)
- シアル酸除去により(製品に添付のSialEXO™使用)結合力UP
- OpeRATOR™酵素(溶出オプション)および、SialEXO™酵素が添付
製品の構成と保管条件
| コンポーネント | 容量 | 保存 |
|---|---|---|
| GlycOCATCH™ Microspin columns | 4本 | +4-8 °C |
| OpeRATOR™ enzyme | 200 units | －20℃ |
| SialEXO™ | 200 units | －20℃ |
※ 輸送条件は冷蔵ですが、到着後は保管条件が異なります。
コンポーネントごとに冷蔵または冷凍で保管してください。
※ GlycOCATCH™ Microspin columnsは冷凍しないでください。
GlycOCHATCHを用いたO型糖鎖ペプチド(glycodrosocin)の精製
糖鎖を持たないペプチドであるH2686、H4062、H8390、酸化型インスリンβ鎖 (IOB)と、O型糖鎖(core 1)ペプチドであるglycodrosocinをサンプルとした。サンプルをGlycOCHATCHに添加・洗浄、8 M 尿素で溶出して精製した。精製したサンプルをRP-LC-MSにて解析したところ、溶出画分(Elute)ではglycodrosocinのみが検出され、その他のペプチドは通過画分(Flowthrough)で検出された。
FAQ
Q GlycOCATCHはすべてのO型糖タンパク質やO型糖ペプチドに結合しますか？
- A
- いいえ、GlycOCATCHはムチンタイプ(core1)のO型糖鎖および、O型ペプチドに特異的に結合します。SialEXOを用いてシアル酸を除去することにより、結合能が大幅に向上します。
Q どのような場合にOpeRATOR溶出を使った方がよいですか？また、その理由は ？
- A
- OpeRATOR酵素は、O-グリコシル化タンパク質をセリン(S)およびスレオニン(T)のグリコシル化部位をN末端側で消化します。したがって、OpeRATORはLC-MSによるO-グリコシル化部位のマッピングを容易にし、消化産物がGlycOCATCHレジンに結合しなくなるため、溶出とサンプル調製を1ステップで実行できます。ただし、LC-MS / MSによる分析に適したサイズのペプチドを生成するOpeRATORによる消化ができるようにO-グリコシル化部位が互いに近接している必要があります。
Q まずOpeRATORで糖タンパク質を消化し、次にGlycOCHATCHでO型糖鎖を濃縮することは可能ですか？
- A
- いいえ、できません。OpeRATORで消化された糖タンパク質はGlycOCHATCHとの結合能を失っています(O-グリコシル化部位のN末端側にいくつかのアミノ酸が残っている必要があるため)。
Q GlycOCHATCHカラムに消化したタンパク質溶液を直接添加することは可能ですか？
- A
- はい、できます。【重要】サンプル添加前に必ず溶液中のプロテアーゼを不活化し、pH、バッファー、変性剤、NaClの濃度を説明書に記載の推奨範囲内に収めてください。
製品一覧
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O型糖鎖タンパク質精製
O型糖鎖修飾タンパク質、ペプチド用精製スピンカラム
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- 掲載されている製品について
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- 試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
- 【医薬品原料】
- 製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
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- 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。
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