同仁化学 Cystine Uptake Assay Kit
シスチンは、シスチントランスポーターであるxCT によって細胞内に取り込まれます。xCTを介して取り込まれたシスチンは抗酸化物質であるグルタチオン（GSH）の原料となり、細胞内の酸化ストレス応答に重要な働きをしています。 多くのがん細胞ではxCT を介したシスチン取り込みが亢進しており、細胞内のグルタチオン量を高レベルに保つことによって細胞内レドックスを制御しています。また、このような高レベルの細胞内グルタチオンががん細胞における薬剤耐性に寄与することが明らかとなっています。そのため、近年xCT はがん治療のターゲットの一つとして注目されています。xCT 阻害剤であるスルファサラジンやエラスチンは、シスチン取り込みを阻害することによって細胞内グルタチオン量を低下させ、細胞死の一つであるフェロトーシスを誘導することが知られています。また、免疫細胞では活性化時にxCT を高発現することが知られており、シスチン取り込みを介した細胞内レドックス制御が免疫応答にも重要であることが示唆されています。
シスチン取り込み検出キットについて
シスチン取り込み検出キットについて
本キットは、Cystine Analog (CA) と蛍光プローブを用いることにより、細胞のシスチン取り込み能力を簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。
測定原理
キットに含まれるCystine Analog（CA）は、シスチンと同様にxCT を経由して細胞に取り込まれます。細胞内に取り込まれたCA を抽出した後、還元剤存在下で検出用プローブFOdA と反応させることによって、CA 量に応じた蛍光シグナルを得ることができます。
実験例① xCT 阻害剤（スルファサラジン、エラスチン）による評価
本キットを用いて、HeLa細胞へのスルファサラジン、エラスチンによる、シスチン取り込み阻害効果を測定しました。スルファサラジン、エラスチンを添加した群では優位に蛍光強度が減少している結果が得られ、いずれの薬剤もシスチン取り込みが阻害することが分かりました。
- 検出条件
- 細胞 ：HeLa cells
- 前処理 ： DMEM（cystine-free, serum-free）, 37 ℃, 5 min
- 取込条件：0.5 mmol/l sulfasalazine or 2 μmol/l erastin /
- Cystine Analog / DMEM（cystine-free, serum-free）,37℃, 30 min
- 測定装置：蛍光プレートリーダー
- 検出条件：Ex=485 nm, Em=535 nm
実験例② ラジオアイソトープ（RI）法との比較
RI 測定を要していたシスチン取り込みアッセイをプレートリーダーで簡便にできるようになりました。本製品と既存法の[14C]標識シスチンを用いたRI測定法を用いて、Wild-type（WT）, xCT-knockou（t KO）, xCT-overexpressed（OE）の3種の細胞における取り込み量を比較しました。その結果、どちらもWT と比較して、KO では取り込み量が減少し、OE では取り込み量が増加しました。したがって、本製品はRI 測定法に対して相関性があることが確認されました。
佐藤 英世 教授 及び 佐藤 茉美 特任助教
検出条件
細胞 ：HT1080 cells
（wild-type or xCT-knockout or xCT- overexpressed）
【Cystine Uptake Assay Kit】
前処理 ：PBS（+）（cystine-free, 0.1% glucose, 0.01% Mg2+, 0.01% Ca2+）, 37℃, 5 min
取込条件 ：Cystine Analog /
PBS（+）（cystine-free, 0.1% glucose, 0.01% Mg2+, 0.01% Ca2+）, 37℃, 30 min
【RI 法】
前処理 ：無し
取込条件 ：0.05 mmol/l cystine + [14C]cystine（ 7.4 kBq/ml） /
PBS（+）（ 0.1% glucose, 0.01% Mg2+, 0.01% Ca2+）, 37℃, 2 min
WT を基準とした時の取り込み量を比較しました。
製品一覧
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