超高純度ヒト間葉系幹細胞(REC)

• 超高純度ヒト間葉系幹細胞(REC)は、間葉系幹細胞に求められる性質をすべて満たしています。

  • 増殖性：未分化性を失わずに自己増幅する機能
  • 分化能：多種多用な細胞に変化することのできる機能
  • 遊走性：体内を循環し適切な場所へ移動し生着する機能
  • 用途：骨疾患・免疫疾患・慢性的な炎症性疾患など、治療の難しい疾患を治癒に導く作用
  • 移植方法：従来型の局所移入だけでなく全身性移入が可能

• REC 細胞

ヒト骨髄に存在する高品質MSC の同定と分離方法開発

研究責任者の松崎教授らは、文部科学省・再生医療の実現化プロジェクトを通じてLNGFR (CD271) Thy1 (CD90)の2 種の抗体を用いることで、極めて効率よくヒトMSC を選別することができることを明らかにし、骨髄・末梢血・胎盤絨毛膜・歯髄からセルソータを用いてヒトMSC を直接分離する技術を開発しました。(Mabuchi et al. Stem Cell Reports 2013)

さらに、96 ウェルプレートでLNGFR Thy1 共陽性細胞(LT細胞)を96 穴プレートに単一細胞分離後(B)に各ウェルを個別に観察し、増殖が速く2週間度にはコンフルエントになったクローンをREC(Rapidly Expanding MSC clone)、3週間後にコンフルエントになったクローンをMEC(Moderately Expanding MSC Clone)、さらに遅れてコンフルエントになったクローンをSEC(Slowly Expanding MSC Clone)と分類した(C)。

Q. 70%コンフルエントまでの培養日数を教えて下さい。

A. 5×10³ cells/cm² で播種して3～5日です。

Q. 培地交換頻度を教えてください。

A. 播種3日後に1回、50%コンフルエントを超えたら毎日行ってください。

Q. 保管温度が-150℃であるが、液体窒素保管でも問題はなありませんか？

A. 耐性のあるチューブを使用しているため、液体窒素保管でも問題ありません。

Q. 本製品は、何継代目で凍結保存されていますか？

A. 本製品は、第5継代で凍結保存されています。

Q. 試験成績書、ドナー情報を提供して頂く事は可能ですか？

A. 提供可能です。弊社までお問合せください。

Q. REC細胞培養プロトコルに使用される試薬情報を教えてください。

A.
DMEM (低グルコース)(L-グルタミン、フェノールレッド含有)：Wako #041-29775
FBS：Hyclone #SH30910-03
HEPES緩衝液：Wako #345-06681
ペニシリン-ストレプトマイシン溶液(×100)：Wako #168-23191
bFGF：Peprotech #100-18C
STEM-CELLBANKER：Takara #CB045

1. Ukeba D, Yamada K, Suyama T, Lebl DR, Tsujimoto T, Nonoyama T, Sugino H, Iwasaki N, Watanabe M, Matsuzaki Y, Sudo H. Combination of ultra-purified stem cells with an in situ-forming bioresorbable gel enhances intervertebral disc regeneration. EBioMedicine. 2022 Jan 24;76:103845. doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103845.
2. Kakizaki M, Yamamoto Y, Nakayama S, Kameda K, Nagashima E, Ito M, Suyama T, Matsuzaki Y, Chiba T, Sumiyoshi H, Inagaki Y, Kotani A. Human hepatocyte-derived extracellular vesicles attenuate the carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice. Cell Death Dis. 2021 Oct 27;12(11):1010. doi: 10.1038/s41419-021-04204-7.
3. Toda E, Bai Y, Sha J, Dong QN, Ngo HX, Suyama T, Miyamoto K, Matsuzaki Y, Kanno T. Feasibility of Application of the Newly Developed Nano-Biomaterial, β-TCP/PDLLA, in Maxillofacial Reconstructive Surgery: A Pilot Rat Study. Nanomaterials (Basel). 2021 Jan 25;11(2):303. doi: 10.3390/nano11020303.
4. Harada S, Mabuchi Y, Kohyama J, Shimojo D, Suzuki S, Kawamura Y, Araki D, Suyama T, Kajikawa M, Akazawa C, Okano H, Matsuzaki Y. FZD5 regulates cellular senescence in human mesenchymal stem/stromal cells. Stem Cells. 2021 Mar;39(3):318-330. doi: 10.1002/stem.3317.
5. Sano H, Watanabe M, Yamashita T, Tanishita K, Sudo R. Control of vessel diameters mediated by flow-induced outward vascular remodeling in vitro. Biofabrication. 2020 Jul 9;12(4):045008. doi: 10.1088/1758-5090/ab9316.
6. Mabuchi Y, Morikawa S, Harada S, Niibe K, Suzuki S, Renault-Mihara F, Houlihan DD, Akazawa C, Okano H, Matsuzaki Y. LNGFR(+)THY-1(+)VCAM-1(hi+) cells reveal functionally distinct subpopulations in mesenchymal stem cells. Stem Cell Reports. 2013 Jul 11;1(2):152-65. doi: 10.1016/j.stemcr.2013.06.001.