超高純度ヒト間葉系幹細胞(REC)
超高純度ヒト間葉系幹細胞(REC)は、フローサイトメトリーと選択的マーカーを用いた細胞分離方法によって得られた間葉系幹細胞(MSC)です。通常の接着法で得た間葉系幹細胞とは異なり、REC は一切の夾雑細胞を含まず、⾧期間の培養増幅が可能です。
また一定期間の培養後も分化・遊走能が維持されています。さらに凍結細胞として保存が可能で、いつでも研究に用いることができます。
特長
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超高純度ヒト間葉系幹細胞(REC)は、間葉系幹細胞に求められる性質をすべて満たしています。
- 増殖性:未分化性を失わずに自己増幅する機能
- 分化能:多種多用な細胞に変化することのできる機能
- 遊走性:体内を循環し適切な場所へ移動し生着する機能
- 用途:骨疾患・免疫疾患・慢性的な炎症性疾患など、治療の難しい疾患を治癒に導く作用
- 移植方法:従来型の局所移入だけでなく全身性移入が可能
技術紹介
ヒト骨髄に存在する高品質MSC の同定と分離方法開発
研究責任者の松崎教授らは、文部科学省・再生医療の実現化プロジェクトを通じてLNGFR (CD271) Thy1 (CD90)の2 種の抗体を用いることで、極めて効率よくヒトMSC を選別することができることを明らかにし、骨髄・末梢血・胎盤絨毛膜・歯髄からセルソータを用いてヒトMSC を直接分離する技術を開発しました。(Mabuchi et al. Stem Cell Reports 2013)
さらに、96 ウェルプレートでLNGFR Thy1 共陽性細胞(LT細胞)を96 穴プレートに単一細胞分離後(B)に各ウェルを個別に観察し、増殖が速く2週間度にはコンフルエントになったクローンをREC(Rapidly Expanding MSC clone)、3週間後にコンフルエントになったクローンをMEC(Moderately Expanding MSC Clone)、さらに遅れてコンフルエントになったクローンをSEC(Slowly Expanding MSC Clone)と分類した(C)。
A:ヒト骨髄中のMSC はLNGFR Thy1 共陽性分画(LT細胞)に存在する
B:LT 細胞の単一細胞分離
C:LT 細胞を単一培養して得たMSC クローンは増殖速度の差によって3つのグループに分類できる
A:REC の細胞形態はサイズが小さく均一である
B:SA-β-gal で染色されない新鮮な細胞である
C:REC の大部分が増殖期にある細胞マーカーであるKi67 陽性である
D:骨分化・脂肪分化共に良好である
E:実験動物への経静脈投与後、肺毛細血管に補足された細胞が認められない
FAQ
- Q. 70%コンフルエントまでの培養日数を教えて下さい。
- A. 5×103 cells/cm2 で播種して3~5日です。
- Q. 培地交換頻度を教えてください。
- A. 播種3日後に1回、50%コンフルエントを超えたら毎日行ってください。
- Q. 保管温度が-150℃であるが、液体窒素保管でも問題はなありませんか?
- A. 耐性のあるチューブを使用しているため、液体窒素保管でも問題ありません。
- Q. 本製品は、何継代目で凍結保存されていますか?
- A. 本製品は、第5継代で凍結保存されています。
- Q. 試験成績書、ドナー情報を提供して頂く事は可能ですか?
- A. 提供可能です。弊社までお問合せください。
- Q. REC細胞培養プロトコルに使用される試薬情報を教えてください。
- A.
DMEM (低グルコース)(L-グルタミン、フェノールレッド含有):Wako #041-29775
FBS:Hyclone #SH30910-03
HEPES緩衝液:Wako #345-06681
ペニシリン-ストレプトマイシン溶液(×100):Wako #168-23191
bFGF:Peprotech #100-18C
STEM-CELLBANKER:Takara #CB045 - Q. REC細胞の無血清培養に使用する培地を教えてください。
- A.
FUJIFILM Irvine Scientific 社の「PRIME-XV MSC XSFM MDF1」を使用し、REC細胞無血清培養プロトコルをご覧ください。
参考文献
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- Yang J, Liu L, Oda Y, Wada K, Ago M, Matsuda S, Hattori M, Goto T, Ishibashi S, Kawashima-Sonoyama Y, Matsuzaki Y, Taketani T. Extracellular Vesicles and Cx43-Gap Junction Channels Are the Main Routes for Mitochondrial Transfer from Ultra-Purified Mesenchymal Stem Cells, RECs. Int J Mol Sci. 2023 Jun 18;24(12):10294. doi: 10.3390/ijms241210294.
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