同仁化学 グルタチオン定量キット
グルタチオン (γ-L-glutamyl-L-cysteinylglycine) は生体内に存在するトリペプチドで、glutathione peroxidase、glutathione S-transferaseおよびthiol transferase等の酵素基質として抗酸化や薬物代謝などに関与しています。グルタチオンは通常、生体内で還元型 (GSH) として存在しているが、酸化ストレスなどの刺激によって還元型 (GSH) から酸化型 (GSSG) に変換されるため、GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標として注目されています。
同仁化学では高感度にtotal glutathioneを定量可能な「Total Glutathione Quantification Kit」および酸化型グルタチオン (GSSG) 、還元型グルタチオン (GSH) の分別定量が可能な「GSSG/GSH Quantification Kit II」をラインアップしています。
Total Glutathione Quantification Kit
グルタチオンは、下記の酵素リサイクリング法によって高感度に検出されます。
5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid) (DTNB) はジスルフィドを分子内に含有し、グルタチオンを酸化すると同時に自身は5-Mercapto-2-nitrobenzoic acidに還元されます。このチオールの吸光度 (λmax=412 nm) よりグルタチオンを定量することができます。
Total Glutathione Quantification Kitは、この酵素リサイクリング法を利用した96穴マイクロプレート用キットです。短時間 (30分以内) で、高感度にtotal glutathioneを定量することが可能です。
測定原理
特長
- 高感度にtotal glutathioneを定量可能 (検出範囲：6.25 - 100 μmol/L)
- 一度に多検体の測定が可能
キット構成
(100 tests)
- Substrate (DTNB)：2本
- インキュベーター：50 µL
- Coenzyme：2本
- Buffer Solution：50 mL
- Standard GSH：1本
キット以外に必要な物
- 20 μL, 200 μLマルチチャンネルピペット
- インキュベーター
- プレートリーダー (405 nmあるいは415 nmフィルター)
- 96穴マイクロプレート
- 5-スルホサリチル酸 (SSA)
操作方法
1. 各ウェルにCoenzyme working solutionとBuffer solution, Enzyme Working solutionを入れ、5分間インキュベートする。
2. GHS standard solutionおよびサンプル溶液を各ウェルに入れ、10分間インキュベートする。
3. Substrate working solutionを各ウェルに入れ、10分間インキュベートする。
4. マイクロプレートリーダーで各ウェルの405 - 415 nmの吸光度を測定する。
※ 詳細は取扱説明書をご参照ください。
参考文献
- O. W. Griffith,"Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide Using Glutathione Reductase and 2-Vinylpyridine", Anal. Biochem., 106, 207(1980).
- M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 113, 548(1985).
- M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 190, 360(1990).
- C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 10, 415(1994).
- S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl,"Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 27, 99(2002).
- T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 174, 530(2006).
- M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 47(9), 3951(2006).
GSSG/GSH Quantification Kit II
本製品には、GSHを隠蔽するためのマスキング剤が含まれており、マスキング剤をサンプルに添加することでサンプル内のGSHのみを隠蔽することができます。その後、酵素リサイクリング法を用いたDTNB[5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid)]発色 (λmax=412 nm) を測定することで、GSSGのみを定量でき、別途、測定した総グルタチオン量からGSSG量を差し引くことでGSH量を求めることが可能です。
測定原理
特長
- 酸化型グルタチオン (GSSG)、還元型グルタチオン (GSH) の分別定量が可能
- 短時間で簡便に多検体の測定が可能
キット構成 (G263)
(200 tests)
- Enzyme Solution：50 µL×1本
- Coenzyme：2本
- Buffer Solution：60 mL×1本
- Substrate (DTNB)：4本
- Standard GSH：1本
- Standard GSSG：1本
- Masking Solution：1 mL×1本
キット以外に必要な物
- 20 μL, 200 μLマルチチャンネルピペット
- インキュベーター
- プレートリーダー (405 nmあるいは415 nmフィルター)
- 96穴マイクロプレート
- 5-スルホサリチル酸 (SSA)
操作方法
1. GSSG, GSH Standard solutionおよびSample AあるいはSample Bを各ウェルに入れる。
2. Buffer solutionを各ウェルに入れ、37℃で1時間インキュベートする。
3. Substrate working solution, Coenzyme working solutionとEnzyme working solutionを各ウェルに加える。
4. 37℃で10分間インキュベート後、マイクロプレートリーダーで各ウェルの吸光度を測定する。
※ 詳細は取り扱い説明書 (G263) をご参照ください。
GSSG/GSH Quantification Kit II (G263) と GSSG/GSH Quantification Kit (G257) の違い
GSSG/GSH Quantification Kit II (G263) はGSSG/GSH Quantification Kit (G257) の改良品であり、性能は同等のままMasking solutionの調整が不要なより扱いやすいキットになっております。
2つのキットを使用してHeLa細胞と赤血球のTotal GSH と GSSG を測定し、同等の結果が得られることを確認しております。
GSSG/GSH Quantification Kit (G257) は2026年3月末をもって販売を終了いたします。
製品一覧
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