ニッポンジーン 耐熱性鎖置換型DNAポリメラーゼ
本品は、5'→3' DNAポリメラーゼ活性と鎖置換型活性を有し、鋳型となる二本鎖DNAの水素結合を自ら解離しつつ、新しいDNA鎖を合成する酵素です。耐熱性鎖置換型DNAポリメラーゼは、その特性から二本鎖DNAの解離を必要としないため、一定温度でのDNA合成が可能であり、またDNAの二次構造による合成阻害を受けません。
【特 長】
- 5'→3' DNAポリメラーゼ活性および鎖置換型活性を有する
- 一定温度でのDNA合成が可能
- 反応温度の異なる3種類の酵素をラインアップ
- GC含量の高いDNA鎖の合成に最適
【用 途】
- 鎖置換活性を利用したアプリケーション
（等温遺伝子増幅法など）
- 鎖置換活性を利用したアプリケーション
製品ラインアップ
| 品 名 | 至適温度 | 失活温度※1 | 構成品 | |
|---|---|---|---|---|
| BST DNA Polymerase | 60～65℃ | 80℃、5分間 | 1) BST DNA Polymerase (8units/μl) 2) 10× BST Reaction Buffer (80mmol/l Mg2+) |
1,600units 500μl |
| Csa DNA Polymerase | 60～70℃ | 85℃、5分間 | 1) Csa DNA Polymerase (8units/μl) 2) 10× Csa DNA Polymerase (80mmol/l Mg2+) |
1,600units 500μl |
| 96-7 DNA Polymerase | 50～55℃ | 70℃、5分間 | 1) 96-7 DNA Polymerase (8units/μl) 2) 10× 96-7 DNA Polymerase (95mmol/l Mg2+) |
1,600units 500μl |
※1:酵素原液をそのまま直接、熱変性した場合の失活温度です。
≪Bst DNA Polymerase≫ LAMP 法への利用
LAMP法反応条件
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Bst DNA Polymerase
反応：65℃、60分間＜反応液組成＞
Candidatus Liberibacter asiaticus DNA※2 1×106copies FIP 40pmol BIP 40pmol F3 Primer 5pmol B3 Primer 5pmol Loop Primer F 20pmol Loop Primer B 20pmol dNTPs Mixture 1.4mM each 10× Bst Reaction Buffer 2.5 μl Bst DNA Polymerase 8units 全量 25μl ※2:Candidatus Liberibacter asiaticusを検出するためのLAMP プライマーセットは、先端技術を活用した農林水産研究高度化事業「難し防除病害カンキツクリーニング病の拡大阻止技術の開発」において、国立研究開発法人 農業・食品産業技術総合研究所機構 九州沖縄農業センターによって開発されました。
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＜レーン＞
M：Gene-Ladder Wide 1(コードNo. 313-06961)
1 : A社 Bst DNA Polymerase
2 : ニッポンジーン社 Bst DNA Polymerase＜備考＞
3.0% アガロース 21/TAEゲル電気泳動 エチジウムブロマイド染色
プライマー配列
FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'
BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3‘
F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'
B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'
Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'
Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'
≪Csa DNA Polymerase、96-7 DNA Polymerase≫ LAMP 法への利用
LAMP法反応条件
＜反応液組成＞
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Csa DNA Polymerase
Candidatus Liberibacter asiaticus DNA 1×106copies FIP 40pmol BIP 40pmol F3 Primer 5pmol B3 Primer 5pmol Loop Primer F 20pmol Loop Primer B 20pmol dNTPs Mixture 1.4mM each 10× Csa Reaction Buffer 1× Csa DNA Polymerase 8units 全量 25μl 反応：65℃、60分間
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96-7 DNA Polymerase
Candidatus Liberibacter asiaticus DNA 1×106copies FIP 40pmol BIP 40pmol F3 Primer 5pmol B3 Primer 5pmol Loop Primer F 20pmol Loop Primer B 20pmol dNTPs Mixture 2.0mM each 10× 96-7 Reaction Buffer 1× 96-7 DNA Polymerase 8units 全量 25μl 反応：65℃、60分間
プライマー配列
-
FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'
BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3‘
F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'
B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'
Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'
Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3' -
＜備考＞
3.0% アガロース 21/TAEゲル電気泳動
エチジウムブロマイド染色
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-
＜レーン＞
M： Gene-Ladder Wide 1(コードNo. 313-06961)
1： Geobacillus 属菌由来鎖置換型 DNA Polymerase
2： ニッポンジーン社 Csa DNA Polymerase
3： ニッポンジーン社 96-7 DNA Polymerase
≪Csa DNA Polymerase、96-7 DNA Polymerase≫ RCA法による耐熱性と至適温度の評価
RCA法反応条件
＜反応液組成＞
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M13mp18 single strand DNA 20ng Universal Primer 50nM dNTPs Mixture 0.25mM each Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃） 20mM KCl 10mM (NH4)2SO4 10mM MgSO4 2mM Tween 20 0.1% DNA Polymerase 8units 全量 20μl -
＜レーン＞
M： Gene-Ladder Wide 1(コードNo. 313-06961)
D： 鋳型DNA(M13mp18) single strand DNA
プライマー配列
Universal Primer
5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'
＜備考＞
0.7% アガロース S/TAEゲル電気泳動
エチジウムブロマイド染色
RCA(Rolling Circle Amplification)法 反応模式図
製品一覧
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