スフェロイド・細胞用透明化試薬

SCALEVIEW®-S4

データ提供元:国立研究開発法人理化学研究所
脳神経科学研究センター細胞機能探索技術研究チーム / 光量子工学研究センター生命光学技術研究チーム
濱裕先生、星田哲志先生、宮脇敦史先生
協力:オリンパス株式会社

SCALEVIEW®-S4は、透明化手法あるScaleS法に使用するSCALEVIEW®-Sシリーズのひとつです。

SCALEVIEW®-S4に浸漬するだけで、スフェロイドやオルガノイドを透明化することができます。

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SCALEVIEW®-S4 特長

  • スフェロイドやオルガノイドの透明化が可能
  • 透明化にかかる時間は約1日 4)
  • 抗体染色/蛍光色素染色が可能

透明化可能組織

スフェロイド、オルガノイド、ニューロスフェア

透明化に必要なもの

★スフェロイド培養にはスリットウェルプレートが便利です。

試薬
  1. SCALEVIEW®-S4
  2. deScale Solution (製品コード:041-34425)
  3. パラホルムアルデヒド (製品コード:160-16061)
器具
  1. 観察用プレート (底面がカバーガラスのものを推奨)
  2. SCALEVIEW®-S4 透明化標本向け蛍光顕微鏡と推奨対物レンズ※※
  • スフェロイドはSCALEVIEW®-S4中では浮遊しやすくなっているため、SCALEVIEW®-S0とSCALEVIEW®-A2を併せての使用を推奨しています (下記プロトコル参照)
  • ※屈折率 (RI=1.49) に合った対物レンズをご用意ください。データ取得前にお手持ちの顕微鏡メーカーに確認することを推奨いたします。

SCALEVIEW®-S4 プロトコル

SCALEVIEW®-S4のみを用いる場合

※透明化後、1.5% (wt/vol) アガロースを用いて包埋し、不動化することで観察が容易になります。

操作手順イメージ 4)

SCALEVIEW®-S0, A2, S4のみを用いる場合

例)ニューロスフェアの透明化

抗体染色はAbScaleプロトコルに基づきます

※透明化後、1.5% (wt/vol) アガロースを用いて包埋し、不動化することで観察が容易になります。

アプリケーション例

T47D細胞スフェロイド観察例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

図1. T47D細胞 スフェロイドのSCALEVIEW®-S4 による透明化画像例
核はHoechstを用いて染色。共焦点顕微鏡を用いてZスタックで、スフェロイド画像を取得。

図2. T47D細胞 スフェロイドのノコダゾール処理後、ヒストンH3抗体を用いた測定例
SCALEVIEW®-S4 による透明化処理により、薬剤投与下のスフェロイド表面と内部への影響を観察することが可能。

ニューロスフェア3次元免疫染色

図3. AbScale法を用いたニューロスフェアの3次元染色
アダルトラットの海馬から調整した神経幹細胞のニューロスフェアの3次元染色。

F-POD®透明化アプリケーション

  • サンプル RLUN14:上皮内腺がん、細気管支肺胞上皮がん

  • サンプル RLUN20

抗体
色素

顕微鏡
対物レンズ
ZO-1-Alexa488 conjugate
Actistain670 (ファロイジン)
DAPI
:FV3000
:UPLSAPO30×S

データ提供元:福島県立医科大学 高木 基樹先生、協力:オリンパス株式会社

F-PDO®(がん組織由来培養細胞)を用いた抗がん剤等の薬効評価解析の受託も承っています。
詳細は、こちらをご確認ください。

iCell® Hepatocytes2.0透明化

詳しいプロトコルはこちら

参考文献

  1. Hama,H.et al. : Nature Neuroscience, 14, 1481(2011).
  2. Hama,H.et al. : Nature Neuroscience, 18, 1518(2015).
  3. Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
  4. Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
  5. Takahashi N, et al. : Cells, 8, 481 (2019).

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SCALEVIEW®は、オリンパス株式会社の登録商標です。
SCALEVIEW®の名称は、富士フイルム和光純薬株式会社がオリンパス株式会社より使用許諾を受けている登録商標です。

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