ロシュ・ダイアグノスティックス　MycoTOOLシリーズ

DNA抽出キット

QC Sample Preparation Kit

　サンプルからDNAテンプレートを抽出するためのキット。

検出キット

MycoTOOL Mycoplasma Detection Amplification kit

　DNAテンプレートをエンドポイントPCRにより増幅し、検出するためのキット

MycoTOOL Mycoplasma Real-Time PCR Kit

　DNAテンプレートをリアルタイムPCRにより増幅し、検出するためのキット

※測定時にはDNA抽出キットとご希望の測定法に応じた検出キットの2種類のキットのご購入が必要です。

注意：リアルタイムPCRで検出を行う際はロシュ･ダイアグノスティックス社のリアルタイムPCR機器(LightCycler®480)が必要となります。

本品はCHO細胞や大腸菌、マイコプラズマのの残留DNAを抽出するためのキットです。 本キットで抽出したDNAをサンプルに応じた検出キット(Residual DNA CHO Kit、Residual E. coli Kit、MycoTOOLシリーズ)を用いてPCR法により増幅、検出してください。

特長

• マイコプラズマDNA検出用DNAテンプレートの抽出が可能
• Residual DNA CHO Kit、Residual E. coli KitのDNAテンプレートの抽出調製にも使用可能
• Triton X-100不含

キット構成^※

Cap Color	Label	容量	数量	用途/詳細
Orange	Proteinase K	850 mL/vial	4本	-
Brown	Lysis Buffer	6 mL/vial	5本	チオシアン酸グアニジン、トリス緩衝液、界面活性剤含有
Grey	Precipitation Reagent	7 mL	5本	核酸沈殿用
White	Washing Buffer	9 mL	6本	洗浄用
Blue	Dissolution Buffer	5 mL	5本	抽出した核酸の溶解用
White	Water, DNA Free	1 mL	10本
White	Poly〔A〕	2 mg	7本
-	Reaction Vials	2 mL ポリプロピレンチューブ x 35本/袋	3袋	凍結乾燥品

※：MycoTOOL用にサンプルを調製する場合１キットで26検体分のサンプル調製が可能です

本品はQC Sample Preparation Kitで抽出したマイコプラズマのテンプレートDNAをエンドポイントPCRにより増幅し、検出するためのキットです。

特長

キット構成^※

Cap Color	Label	容量	数量
Red	RM1a	45 μL	5本
Brown	RM1b	570 μL	5本
Grey	MgCl2-Solution	600 μL	5本
Blue	Primer Mix, Mycoplasma	40 μL	5本
Violet	Primer Mix, GAPDH	30 μL	5本
Yellow	Detection Dye	120 μL	5本
Turquoise	PCR grade Water	1 mL	5本
White	Dilution Buffer	1 mL	5本
White	Negative Control	1 mL	5本
Green	Positive Control	55 μL	5本
Orange	DNA Molecular Weight Marker	200 μL	1本

使用方法

本品はQC Sample Preparation Kitで抽出したマイコプラズマのテンプレートDNAをリアルタイムPCRにより増幅し、検出するためのキットです。

特長

使用例

全般

各キットは何回用なのか?

QC sample preparation kitはMycoplasmaの検出に使用する場合は26回用です。
MycoTOOL Mycoplasma Detection Amplification kit、 MycoTOOL Mycoplasma Real-Time PCR Kitはともに10回用です。

UNGシステムとは何か?

UNG(ウラシル-DNA グリコシラーゼ)がDNA上のウラシル(U)を除去することを利用したシステムです。塩基を失ったDNAは増幅反応の最初の加熱によってリン酸結合が切断され、新たな増幅の鋳型とはなりません。また、UNGは6塩基以上のDNA上のウラシルにのみ反応し、モノマーのdUTPのウラシルには作用しません。
よって、夾雜PCR産物のコンタミネーションがあっても、UNGにより分解されます。UNGは増幅反応の初めに95℃の加熱で失活されます。

キャリアDNAはどのような場合に必要なのか?

ヒト細胞やMDCK細胞などのサンプルがげっ歯類以外の細胞の場合(エンドポイントPCRのみ)や、DNAが少ない又はDNAが含まれないサンプルの場合(エンドポイントPCR/リアルタイムPCR 共通)に必要です。サンプルのインターナルコントロールとして、CHO細胞のGAPDH遺伝子用のプライマーペアがキットに使用されているためです(キャリアDNAはCHO細胞のゲノムDNA)。

キャリアDNA(5×320uL)は何回用なのか?

1回の使用量は最大80uLです(使用量は細胞によって最適化してください)。
よって少なくとも20回以上の使用が可能です。

QC Sample Preparation Kitに含まれるPoly[A]の用途は?

Poly[A]はマイコプラズマのDNA抽出では使用しません。QC Sample Preparation KitはMycoTOOLではなく、DNACHO残存キットやE.coli残存キットといった他の検出キットを使用する。

バリデーションデータは開示可能か?

バリデーションデータの開示に関してはロシュ・ダイアグノスティックス社との秘密保持契約が必要です。詳しくはお問い合わせください。

エンドポイントPCR

電気泳動後の染色操作が不要である理由は?

PCR反応液中に染色剤が含まれるためです。電気泳動終了後、すぐに観察することができます。

GAPDHの100倍希釈サンプルのほうが泳動距離が短くなる理由は?

DNA量が少ないと全体のチャージが少なくなり、移動度が小さくなるためです。

リアルタイムPCR

使用できるリアルタイムPCRの機器は?(リアルタイムPCR)

機器はRoche社Light Cycler^®480でバリデーション済み。他の機種に関しましては、Cp値に関してお客様にて設定いただく必要があります。詳しくはお問い合わせください。

MycoTOOL リアルタイムPCRキットのRecovery Controlはどのような目的で入っている？

抽出操作に失敗した際に、「陰性」と判定してしまわないためです。共沈剤の役割も兼ねているため、リアルタイムPCRキットで検出する場合、サンプルのDNAの抽出操作において、共沈剤が不要な細胞数であればキャリアDNAは不要です。