1-シアノメチル-2-シアノエチル N,N,N',N'-テトライソプロピルホスホロジアミダイト 1-Cyanomethyl-2-cyanoethyl N,N,N',N'-tetraisopropylphosphorodiamidite

1. 高い安定性

• 誘導したホスホロアミダイト体の精製・保存時の安定性が向上
• 従来のアミダイト化試薬と同等の反応性を保持

2. 取り扱いやすさと物理的特性

• 有機溶媒への高い溶解性 (アセトン、アセトニトリル、THFに可溶)
• 取り扱いが容易な結晶性固体 (融点：111℃)

³¹P NMRの測定により、ホスホロジアミダイトの安定性を比較した結果を以下に示します。

ホスホロジアミダイト 1

従来使用されている直鎖型ホスホロジアミダイト 1 (2-シアノエチル=N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト) は油状物質です。室温で保存したところ、7日間で分解が進み、³¹P NMR測定により複数の不純物の発生が確認されました。さらに、1を用いて得られる一級アルコールからなるホスホロアミダイト誘導体についても、その安定性は十分と言えず、収率が低下します。

ホスホロジアミダイト 2

一方、新たに開発した分岐型ホスホロアミダイト 2 は固体であり、室温下でも7日間ほとんど分解が確認されませんでした。また、2 を用いて合成した一級アルコールからなるホスホロアミダイト誘導体は分岐構造により立体的にかさ高くなっているため、安定性が高く、高収率で得ることができます。なお、分岐構造を持つホスホロアミダイト誘導体は、通常のオリゴ核酸合成条件によりオリゴ核酸に導入可能です。

一級アルコールを用いたホスホロアミダイトの合成

一級アルコールから合成したホスホロアミダイトの安定性比較（³¹P NMRの測定）

従来の直鎖型のホスホロアミダイトをシリカゲルのAcOEt溶液で24時間撹拌したところ、³¹P NMR測定により完全に分解されていることが分かりました。一方、分岐型のホスホロアミダイトではほとんど分解は確認されず、安定性が高いことが示されました。

ホスホロアミダイトを用いたDNAの合成

例として、5’-末端にコレステロールを有するオリゴDNAの合成を行ったところ、通常のDNA合成条件下で目的のオリゴDNAを合成することができました。
他の分岐型ホスホロアミダイトも同様に、通常のDNA合成条件下でオリゴDNAに導入可能です。

参考文献

1. 張 功幸、伊藤 勇太：特願2025-184878, 「ホスホロアミダイト試薬、ホスホロアミダイト、及び、ヌクレオシド誘導体の製造方法」