抗シナプシンⅠ, モルモット Anti SynapsinⅠ, Guinea Pig

シナプシンはシナプス小胞結合タンパク質の一種で、シナプス小胞の動態制御に関与していると考えられています。主に神経終末に局在していることから、免疫組織染色などにおいて前シナプスマーカーとして利用されています。「抗シナプシンI, モルモット」はモルモットから得られたシナプシンIに対するポリクローナル抗体です。免疫組織染色の多重染色に使用可能です^1-2)。

抗体情報

プロトコル (例)

1.灌流固定

0.1% クエン酸ナトリウムPBSによる脱血後、4% PFA灌流

2.後固定

4% PFA (24時間)

3.スクロース置換

30% スクロースPBS (4 ℃, 一晩～2日程度)

4.凍結切片作製

スクロース除去後、凍結包埋ブロックを作製し、クライオスタットによる30 μm厚スライス作製

5.グリシン処理

25 mMグリシンPBS (20分程度)

6.ブロッキング

5% 正常ヤギ血清, 0.3% TritonX-100/PBS (4 ℃, 一晩)

7.一次抗体

抗シナプシンI, モルモット (1:1,500), 1% 正常ヤギ血清, 0.3% TritonX-100/PBS (4 ℃, 一晩～2日)

8.洗浄

0.3% TritonX-100/PBS (5分×3回)

9.二次抗体

Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:500) (コードNo. 568-77901), 1% 正常ヤギ血清, 0.3% TritonX-100/PBS (室温, 2時間)

10.洗浄

0.3% TritonX-100/PBS (5分×3回)

11.封入

4 ℃, 暗所保存

アプリケーションデータ

免疫組織染色

動物種　　マウス
部位　　　海馬CA3
サンプル　凍結切片
抗体濃度　1:1,500

<データ提供>
京都工芸繊維大学 応用生物学系 宮田先生

動物種　　マウス
部位　　　大脳皮質V層
サンプル　凍結切片
抗体濃度　1:1,500

<データ提供>
京都工芸繊維大学 応用生物学系 宮田先生

免疫細胞染色

細胞種　　ラット海馬 初代培養神経細胞
抗体濃度　1:1,000

<データ提供>
京都工芸繊維大学 応用生物学系 宮田先生

[結果]
培養7日目にはシナプスはほとんど形成されていないが、培養21日目には顕著な粒状のシナプスが多数観察された。培養細胞はターンオーバーが早く、細胞体においては小胞体で合成中あるいは軸索輸送中のシナプシンIが弱い蛍光として検出されたと考えられる。

細胞種　　ラット海馬 初代培養神経細胞
抗体濃度　1:1,000
備考　　　白矢頭 → GAP-43単独陽性シナプス
　　　　　黒矢印 → シナプシンI単独陽性シナプス

<データ提供>
京都工芸繊維大学 応用生物学系 宮田先生

[結果]
ラット海馬 初代培養神経細胞のシナプス (白矢印) において、GAP-43とシナプシンIの共局在が認められた。

1. Morita, S. and Miyata, S.: Cell Biochem. Funct., 31(5), 400(2013).
   Synaptic localization of growth‐associated protein 43 in cultured hippocampal neurons during synaptogenesis
2. Kawai, S. et al.: Cell Biochem. Funct., 38(4), 392(2020).
   Transient increase of microglial C1q expression in the circumventricular organs of adult mouse during LPS‐induced inflammation