BAC Tg遺伝子改変動物作製
セミノックインマウス・ラット
ゲノムDNAクローンを利用した作出サービス
特定の細胞、組織選択的にレポーター遺伝子（GFP、ルシフェラーゼ等）を発現するマウス（ラット）モデルは、in vivoにおける遺伝子機能の解析に非常に有用です。しかし、従来のトランスジェニックマウス（ラット）技術では、目的の細胞、組織に正確に外来遺伝子を発現させることは非常に困難な作業でした。また、SNP解析等で得られた変異をもった遺伝子の機能解析をin vivoで実験するには、その遺伝子サイズと発現環境より難しい面がありました。
ゲノムDNAクローンを利用したノックインマウス（ラット）は、200 kbにおよぶゲノムDNA配列の組換え体を直接導入されたトランスジェニックラットです。コアプロモーターに加えて、組織特異的エンハンサーを含む発現ユニットを全て導入できるので、特定の細胞、組織選択的に外来遺伝子を発現させることが可能です。また、目的とする遺伝子を含むヒトゲノムDNAクローンが存在すれば自由自在に作製が可能です。
受託の流れ
Red/ETテクノロジーについて
セミノックイン動物の作製を可能にした“大腸菌体内での遺伝子ターゲティング”はGene Bridges GmbHより実施許諾権を取得しています。
大腸菌内での能動型相同組み換え反応 であるRed/ET Recombination Technology （Zhang Y et al, A new logic for DNA engineering using recombination in E.coli., Nature 20 （1998） 123-128） を利用して、標的とする遺伝子を含むBACクローンから導入したい遺伝子を含む組換えBACクローンを構築することができます。
セミ・ノックイン（BAC Tg）マウス・ラット
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ゲノムレベルのhumanized model
１．単一遺伝子疾患の発症メカニズム、治療法の探索
２．SNPsデータの生物学的評価
３．抗体医薬開発における病態モデル動物の作製
の研究に有効利用できると考えています。
Red/ET systemとは
組換えタンパク発現plasmidを目的とするBACクローンを保有する大腸菌に導入し、相同組み換えを行うシステムです。
組換え酵素ペアRedα/Redβ（またはRecE/RecT）によるDouble-strand Break Repair（DSBR）
１）Redα（またはRecE）の5'→3'エキソヌクレアーゼ活性により3'側のDNAが一本鎖になります。
２）この突出した3'側の一本鎖DNAにRedβ（またはRecT）が結合します。
３）タンパク質－核酸フィラメントに、相同なDNAが結合し、3'末端がプライマーとなり複製されます。
実験例：Red/ETテクノロジーを利用したADP-lucセミノックインマウス
価格
| ベクター構築費 | 難易度 低1 | 難易度 低2 | 難易度 普通 | 難易度 高 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 塩基置換タイプ | レポーター遺伝子挿入タイプ | プロモーター組換えモデル | BAC連結タイプ | ||
| トリミングタイプ | ヒト化タイプ | 遺伝子発現誘導タイプ | |||
| 発現制御タイプ(停止コドン付) | 複合型 | ||||
| Red/ET使用回数 | 5 | ||||
| 4 | |||||
| 3 | 3 | ||||
| 2 | 2 | 2 | |||
| 1 | 1 | 1 | 1 | ||
| 希望納入価格 | 128万円 | 174万円 | 235万円 | 330万円以上 | |
| 精製作業 | 希望納入価格 | 30万円 | |||
| インジェクション作業 | 希望納入価格 | 120万円(マウス300個injection/ラット200個injection) | |||
| サザン解析 | 希望納入価格 | 30万円 | |||
| 合計 | 308万円 | 354万円 | 415万円 | 510万円以上 | |
お見積り・ご注文について
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