Polysciences社 ストレプトアビジンコーティング磁気ビーズ
Polysciences社では超常磁性の磁気ビーズの表面にストレプトアビジンをコーティングした製品を提供しています。本製品を使用することでビオチン化物質の精製が可能となります。核酸精製のためのヌクレアーゼフリーの製品も提供しています。
製品概要
本製品は磁気ビーズの表面にストレプトアビジンをコーティングした製品です。本製品を用いた精製にはマグネティックセパレーターが必要となります。
【各製品の違い】
| 製品 | ビーズ サイズ |
ビーズ 濃度 |
バッファー組成 | ビオチンへの結合能 |
|---|---|---|---|---|
| BioMag® Streptavidin | 約1.5µm | 5mg/mL | PBS(pH 7.5), 0.1% BSA with EDTA, アジ化ナトリウム | 1mg(200µL)の本製品で2μgのビオチンと結合 |
| BioMag®Plus Streptavidin | 約1.0µm | 5mg/mL | PBS(pH 7.4), 0.1% BSA, アジ化ナトリウム | 1mgの本製品の結合能： >1500pmoles 非結合ビオチン >1000pmoles 20mer ビオチン標識オリゴヌクレオチド >200pmoles 100mer ビオチン標識オリゴヌクレオチド >70pmoles 300bp 5-ビオチン標識二本鎖DNA >25pmoles 1Kbp 5-ビオチン標識二本鎖DNA |
| BioMag® Nuclease-Free Streptavidin Particles | 約1.5µm | 1mg/mL | PBS(pH 7.4), 0.1% BSA, アジ化ナトリウム | 1mgの本製品の結合能： >1500pmoles 非結合ビオチン >1000pmoles 20mer ビオチン標識オリゴヌクレオチド >200pmoles 100mer ビオチン標識オリゴヌクレオチド >70pmoles 300bp 5-ビオチン標識二本鎖DNA >25pmoles 1Kbp 5-ビオチン標識二本鎖DNA |
使用用途例
- セルソーティング（ビオチン化された細胞表面抗原に結合する抗体を使用）
- ビオチン化核酸の精製（BioMag® Nuclease-Free Streptavidin Particlesの使用を推奨）
BioMag® Nuclease-Free Streptavidin Particlesを用いたビオチン標識核酸の使用例
【本製品以外に必要なもの】
- Binding Buffer: 20mM Tris and 0.5M NaCl at pH 8.0
- Wash Buffer: 7mM Tris and 0.17M NaCl at pH 8.0
- DEPC処理水
- Nuclease-free マイクロチューブ
- マグネティックセパレーター
本プロトコールはビオチン標識されたオリゴ(dT)を本製品に結合させた後に、約75-100 µgのTotal RNAから1-2 μgのmRNAを精製した例となります。
*本使用例は実験によって最適化してください。
① 本製品をヌクレアーゼフリーのマイクロチューブに200 µLずつ分注します。マグネティックセパレーターを使い、マイクロチューブ内の片方に磁気ビーズを30秒間寄せます。その後、上清を除き100 µLのBinding Bufferを加えます。
② 適量のビオチン標識オリゴヌクレオチドを①に加え15分間室温でインキュベートします。
③ マグネティックセパレーターで30秒間マイクロチューブの片方に寄せ上清を除きます。その後Binding Bufferでビオチン標識オリゴが結合した磁気ビーズを2回洗浄します。上清を除き、磁気ビーズがマイクロチューブ内に残します。
④ 別の新しいマイクロチューブにTotal RNAサンプルをDEPC処理水に入れ、90 µLにします。
⑤ ④のサンプルRNAを含むサンプルを55℃で5分インキュベートして、RNAの二次構造を解きます。
⑥ ⑤に5M NaClを10 µL加えます。（最終濃度が0.5M NaCl）
⑦ Total RNA⑥を③の磁気ビーズを含むマイクロチューブに入れ3分間室温でハイブリダイズさせます。
⑧ マグネティックセパレーターでマイクロチューブの片方に寄せ、100 µLのWashバッファーで洗浄します。
⑨ 結合したmRNAを25-50 µLのDEPC処理水で55℃、2分間溶出します。
⑩ マグネティックセパレーターでマイクロチューブの片方に寄せ、上清を新しいマイクロチューブに移します。
⑪ 再度⑨～⑩の操作を繰り返し、上清を⑩で上清を移したマイクロチューブに加えます。
【実験概要】
製品一覧
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BioMag® Streptavidin
BioMag® Plus Streptavidin
BioMag® Streptavidin (ヌクレアーゼフリー)
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