一次抗体のFc領域に特異的に結合するFabフラグメント二次抗体

Jackson社 FabuLight™ Fab Anti-Fc Fragment Secondary Antibodies

FabuLight™抗体は、IgGおよびIgM一次抗体のFc領域に特異的に結合するFabフラグメント二次抗体です。蛍光標識や、Biotin標識された製品のラインアップもあります。FabuLight™抗体は一価であるため、一次抗体の抗原結合部位の活性を損なうことなくFc領域に結合し、その複合体は沈殿、凝集しないので、細胞や組織と反応させる前に一次抗体の標識が可能となり、Flow Cytometryや免疫組織染色におけるインキュベーションの手順を短縮できます。また本製品は、クロスリンクやB細胞を活性化させることなく細胞表面上のイムノグロブリンを標識したり、Fc融合キメラタンパク質の標識を可能にします。

インキュベーションと洗浄ステップの短縮が可能

蛍光標識またはBiotin標識されたFabuLight™抗体と一次抗体を反応させた複合体を使用することで、Flow Cytometryにおいて細胞の洗浄回数を減らし、細胞へのダメージを減らすことができます。また、同一動物種由来の複数の一次抗体を使用する際には、インキュベーション回数も減らせます。

一次抗体の抗原結合部位への影響はなし

本製品は一次抗体のFc部位と結合するため、抗原結合部位の活性に影響はありません。

沈殿しない

本製品は一価であるため、本製品と一次抗体との複合体は沈殿や凝集を起こしません。そのため、高い組織浸透性と、低い非特異的反応を提供します。

ご注意

本製品は、交差反応を防ぐための他の動物種との吸収処理を行っておりません。内因性イムノグロブリンとの非特異的反応を防ぐ必要がある場合は、本製品と一次抗体の複合体を使用する前に、非標識のFab Anti-IgG(H+L)でブロッキング処理を行ってください。

FabuLight™標識抗体をマウス組織上の二つの抗原に使用する実験例



1. サンプル組織上にFabuLight™により認識される可能性のある内因性イムノグロブリンが存在している場合は、非標識のFab Anti-IgG(H+L)でブロッキングを行う。

例)AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific (メーカーコード: 115-007-185) または、AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (メーカーコード:115-007-003) で組織サンプルをインキュベートし、その後洗浄する。



2. FabuLight™標識抗体と一次抗体を反応させて複合体を形成させる。

例)Alexa Fluor® 488 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific (メーカーコード:115-547-185) とマウス抗-抗原Xの複合体、および、Rhodamine Red™-X AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific (メーカーコード:115-297-185) とマウス抗-抗原Yの複合体を作製する。



3. サンプルに2で作製したAlexa Fluor® 488 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specificとマウス抗-抗原Xの複合体を添加し、インキュベートして反応させ、その後洗浄する。



4. サンプルに2で作製したRhodamine Red™-X AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specificとマウス抗-抗原Yの複合体を添加し、インキュベートして反応させ、その後洗浄する。

3次元組織染色・観察技術(CUBIC-HV法)

© 2020 RIKEN/Nature Communications

理化学研究所(理研)生命機能科学研究センター合成生物学研究チームの上田泰己チームリーダー(東京大学大学院医学系研究科システムズ薬理学教室教授)、洲﨑悦生客員研究員(同准教授)らの共同研究グループは、組織透明化技術と組み合わせて利用できる全臓器・全身スケールの3次元組織染色・観察技術「CUBIC-HistoVIsion(CUBIC-HV)」を確立しました。
CUBIC-HV法(CUBICに基づく3次元組織学・3次元イメージング)は、CUBIC透明化法、高速ライトシート顕微鏡との組み合わせにより、マウスの全脳、マーモセットの半脳、ヒト脳組織ブロック等を均一に染色し、3次元的な全臓器組織観察を可能にしました。
本法の免疫染色においてFabuLight™抗体が使用されています。

© 2020 RIKEN/Nature Communications

【参考文献】

  1. Susaki, E. et al. : Nat Commun., 11(1), 1982 (2020).

論文使用製品一覧

メーカーコード 製品名
115-547-185 Alexa Fluor® 488 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific
115-167-185 CyTM 3 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific
115-587-185 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific
115-607-185 Alexa Fluor® 647 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ fragment specific
115-587-186 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2a, Fcγ fragment specific
115-607-186 Alexa Fluor® 647 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2a, Fcγ fragment specific
115-587-187 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2b, Fcγ fragment specific
112-167-008 CyTM 3 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rat IgG, Fcγ fragment specific
112-587-008 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rat IgG, Fcγ fragment specific
111-167-008 CyTM 3 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific
111-587-008 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific
111-607-008 Alexa Fluor® 647 AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific
805-587-008 Alexa Fluor® 594 AffiniPure Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG, Fc fragment specific
CUBIC については こちら

FabuLight™抗体によるウエスタンブロッティングの応用例 (免疫沈降後の重鎖特異的検出)

FabuLight™抗体を用いたブロッキングにより、ウェスタンブロットで25 kD 付近にバンドの出る変性イムノグロブリン重鎖由来のシグナルを抑えて目的タンパク質を明瞭に検出することができます。

Lane 1: Mouse IgG, Fc fragment (0.1 μg) + Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (2 μg)

Lane 2: Mouse IgG, Fc fragment (0.1 μg) + Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (5 μg)

Lane 3: Mouse IgG, Fc fragment (0.1 μg) + Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (10 μg)

Lane 4: Mouse IgG, Fc fragment (0.1 μg) + Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (20 μg)
ご注意
免疫沈降にマウス由来の抗体を使用した場合は、FabuLight™抗体も、使用した抗体と同一のサブクラスをご使用ください。

ChromPure™ Mouse IgG, Fc fragment (メーカーコード:015-000-008)に AffiniPure Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (メーカーコード:315-005-008) を添加して免疫沈降を行った後、3枚のゲルを用いてSDS-PAGE後、ニトロセルロース膜に転写した。ブロットはBSA (10% w/v) でブロッキングを行った。

ABCの各条件でインキュベーションを行った後、化学発光(ECL)で検出した。

A
FabuLight™抗体でブロッキング:なし
一次抗体:なし
二次抗体:Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific (メーカーコード:111-035-008), 1:200K
免疫沈降に使用された抗体の重鎖(50kD)と分解した重鎖(25kD)が二次抗体で検出された。

B
FabuLight™抗体でブロッキング:AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific (メーカーコード:111-007-008), 200 μg/mL
一次抗体:なし
二次抗体:Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific (メーカーコード:111-035-008), 1:200K
免疫沈降に使用された抗体の重鎖のシグナルは大幅に減少した。免疫沈降に使用した抗体が少ないレーン (2~10 μg/well)では、分解した重鎖(25kD)は検出されなくなった。

C
FabuLight™抗体でブロッキング:AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific (メーカーコード:111-007-008), 200 μg/mL
一次抗体:AffiniPure Rabbit Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu Sr Prot) (メーカーコード:315-005-046), 1 μg/mL
二次抗体:Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG, Fc fragment specific (メーカーコード:111-035-008), 1:200K
Mouse IgGの特異的検出による25kDの目的タンパク質のバンドが現れた。免疫沈降に使用した抗体が少ないほど、目的タンパク質のバンドがシャープになることがわかる。

ターゲット動物種

Anti-Chicken(ニワトリ)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Chicken IgY (IgG),
Fc Fragment Specific
103-007-008 103-067-008 103-477-008 103-547-008 103-167-008 103-117-008 103-297-008 103-587-008 103-607-008 103-627-008 103-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Goat(ヤギ)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Bovine
Anti-Goat IgG,
Fc Fragment Specific
805-007-008 805-067-008 805-477-008 805-547-008 805-167-008 805-117-008 805-297-008 805-587-008 805-607-008 805-627-008 805-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Guinea Pig(モルモット)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Guinea Pig IgG,
Fc Fragment Specific
106-007-008 106-067-008 106-477-008 106-547-008 106-167-008 106-117-008 106-297-008 106-587-008 106-607-008 106-627-008 106-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Human(ヒト)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Human IgG,
Fcγ Fragment Specific
109-007-008 109-067-008 109-477-008 109-547-008 109-167-008 109-117-008 109-297-008 109-587-008 109-607-008 109-627-008 109-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Human IgM,
Fc Fragment Specific
109-007-043 109-067-043 109-477-043 109-547-043 109-167-043 109-117-043 109-297-043 109-587-043 109-607-043 109-627-043 109-657-043
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Mouse(マウス)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgG1,
Fcγ Fragment Specific
115-007-185 115-067-185 115-477-185 115-547-185 115-167-185 115-117-185 115-297-185 115-587-185 115-607-185 115-627-185 115-657-185
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgG2a,
Fcγ Fragment Specific
115-007-186 115-067-186 115-477-186 115-547-186 115-167-186 115-117-186 115-297-186 115-587-186 115-607-186 115-627-186 115-657-186
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgG2b,
Fcγ Fragment Specific
115-007-187 115-067-187 115-477-187 115-547-187 115-167-187 115-117-187 115-297-187 115-587-187 115-607-187 115-627-187 115-657-187
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgG2c,
Fcγ Fragment Specific
115-007-188 115-067-188 115-477-188 115-547-188 115-167-188 115-117-188 115-297-188 115-587-188 115-607-188 115-627-188 115-657-188
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgG3,
Fcγ Fragment Specific
115-007-189 115-067-189 115-477-189 115-547-189 115-167-189 115-117-189 115-297-189 115-587-189 115-607-189 115-627-189 115-657-189
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Mouse IgM,
µ Chain Specific
115-007-020 115-067-020 115-477-020 115-547-020 115-167-020 115-117-020 115-297-020 115-587-020 115-607-020 115-627-020 115-657-020
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Rabbit(ウサギ)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Rabbit IgG,
Fc Fragment Specific
111-007-008 111-067-008 111-477-008 111-547-008 111-167-008 111-117-008 111-297-008 111-587-008 111-607-008 111-627-008 111-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

Anti-Rat(ラット)

抗体名 非標識 Biotin-SP
(long spacer)
DyLight™ 405
A=400,E=421
Alexa Fluor® 488
A=493,E=519
Cyanine Cy™ 3
A=550,E=570
Phycoerythrin R-PE
A=488,E=580
Rhodamine Red™-X
A=570,E=590
Alexa Fluor® 594
A=591,E=614
Alexa Fluor® 647
A=651,E=667
Alexa Fluor® 680
A=684,E=702
Alexa Fluor® 790
A=792,E=803
Fab Fragment Goat
Anti-Rat IgG,
Fcγ Fragment Specific
112-007-008 112-067-008 112-477-008 112-547-008 112-167-008 112-117-008 112-297-008 112-587-008 112-607-008 112-627-008 112-657-008
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information
Fab Fragment Goat
Anti-Rat IgM,
µ Chain Specific
112-007-020 112-067-020 112-477-020 112-547-020 112-167-020 112-117-020 112-297-020 112-587-020 112-607-020 112-627-020 112-657-020
Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information Product Information

製品一覧

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Fab Fragment Goat Anti-Chicken IgY (IgG), Fc Fragment Specific

Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG, Fc Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Guinea Pig IgG, Fc Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Human IgM, Fc Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG1, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2a, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2b, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG2c, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG3, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgM, µ Chain Specific

Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Rat IgG, Fcγ Fragment Specific

Fab Fragment Goat Anti-Rat IgM, µ Chain Specific

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