同仁化学 細胞用 過酸化脂質検出蛍光試薬(Liperfluo)
Liperfluo は、Spy-LHP の類似化合物で、過酸化脂質検出用の試薬です。過酸化脂質で特異的に酸化され、エタノール等の有機溶媒中で強い蛍光を発します。Liperfluo 酸化体の励起波長および蛍光波長は、それぞれ524 nm、535 nm と長波長なので、測定試料への光によるダメージや試料由来の自家蛍光の影響を軽減できます。
本製品は、ジイソキノリン環の片方にテトラエチレングリコール基が導入されたもので、Spy-LHP よりも水系バッファー中での分散性が向上しています。Liperfluo 酸化体は水中ではほとんど蛍光を発しませんが、細胞膜等の脂溶性の高い部位では蛍光性となることから、容易に蛍光顕微鏡による生細胞の過酸化脂質のイメージングやフローサイトメトリーによる細胞の過酸化脂質量の分析に使用することができます。
Liper-fluo
- 化学名：N-(4-Diphenylphosphinophenyl)-N'-(3,6,9,12-tetraoxatridecyl)perylene-3,4,9,10-tetracarboxydiimide
- CAS RN® .：1448846-35-2
特長
- 細胞の過酸化脂質のイメージングや検出が可能
- 長波長励起のため、細胞への光ダメージや自家蛍光の影響を軽減
- 過酸化脂質特異性が高い
過酸化脂質によるLiperfluoの励起および蛍光スペクトル変化(エタノール溶媒中)
Liperfluoの活性酸素種に対する反応選択性
SH-SY5Y 細胞における各種薬剤刺激による過酸化脂質イメージング
操作手順
- 使用細胞:SH-SY5Y 6 well Plateに播種 (60 x 105 cell/well)
↓終夜(37 ℃, CO2インキュベート) - LiperfluoのDMSO溶液を添加(終濃度：20 μM)
↓15min (37 ℃, CO2インキュベート) - Cumene添加(終濃度：100 μM)
↓2h (37 ℃, CO2インキュベート) - 蛍光顕微鏡で測定
装置：Olympus IX-71 epifluorescent microscope
ミラーユニット：U-MNIBA3
露光時間：10sec
lSO感度：800
薬剤による酸化ストレス刺激により明確な蛍光増加が確認できた。
データ提供：同志社大学 医生命システム学科 野口範子先生
生細胞を用いた過酸化脂質の共焦点顕微鏡イメージング
操作手順
- 使用細胞：L929細胞(マウス繊維芽細胞由来培養細胞株) 35 mmガラスボトムディッシュに播種(2.5 x 105 cell/well)
↓一昼夜培養 (37 ℃, CO2インキュベート) - 培地除去後、Liperfluoを含む新しい培地を添加 (終濃度：1 μM)
↓30 min (37 ℃, CO2インキュベート) - 培地除去後、t-BHPを含む新しい培地を添加 (終濃度：250 μM)
↓2 h (37 ℃, CO2インキュベート) - 共焦点レーザー顕微鏡にて観察
装置：Zeiss LSM510META
フィルターセット：FITC (GFP, Alexa488) wide filter
HFT UV/488
NFT490
BP505-550
データ提供：北里大学薬学部 今井浩孝先生、熊谷剛先生
使用実績
フェロトーシス研究での評価例
細胞死メカニズムの一つとして注目を集めるフェロトーシス研究においてLiperfluo が使われています。
過酸化脂質生成とフェロトーシス
Liperfluo を用いた論文
| サンプル (フェロトーシス誘導法) | 論文情報タイトル |
|---|---|
| ヒト気管支上皮細胞 (RSL3 及び菌培養上清の添加) |
Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium. |
| マウス繊維芽細胞 (RSL3 の添加) |
Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis. |
| HeLa 細胞 (Erastin 又はBrefeldin A の添加) |
Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells. |
同仁化学研究所 HPで参考文献など閲覧可能です。
http://dominoweb.dojindo.co.jp/goodsr7.nsf/View_Display/L248?OpenDocument
製品一覧
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