脳組織凍結保存溶液

解剖

1. マウスもしくはラットに麻酔をかける。
2. 麻酔がかかった動物を全身 (髭・尻尾の先まで) 70%エタノールにつけ殺菌する。
3. キムワイプを敷いたステンレスバットなどでクリーンブース内に動物を持ち込む。
4. 妊娠動物から胎児を取り出し、L-15液の入ったシャーレに入れる。シャーレとL-15液はあらかじめ4℃で冷やしておく。胎児の入ったシャーレは氷上に静置する。
   ※L-15液：終濃度0.05 mg/mLゲンタマイシン硫酸塩を含むライボビッツL-15培地
5. シャーレの蓋に胎児を移し、顕微鏡を用いて素早く脳組織を摘出する。
6. 解剖後の脳組織を別のL-15液の入ったシャーレに移し、氷上に静置する。

一次冷却

1. 冷凍庫から本製品と冷却用クラッシュアイス箱をクリーンベンチの近くに持ってくる。
2. 氷冷中の脳組織をピンセットで本製品に入れ、チューブのふたをきつく閉める (脳組織を入れる前に保存溶液をよく混合する)。
3. 冷却用クラッシュアイス箱の氷にチューブを埋め、氷を密着させる (チューブはふたが氷から少し出る位まで深く埋める)。
4. 発泡スチロール箱の蓋を閉め、90分静置する。

二次冷却

1. 一次冷却終了後、組織入りチューブをフリーズボックスに移し、直ちに超低温フリーザー (-80℃) に入れる。(フリーズボックスはフリーザー内の底面に直接置く。)
   ※組織入りチューブの温度変化を最小にするよう、手早く作業する。
   ※この時、組織入りチューブは蓋を持ち、保存溶液が入っている部分は絶対に触らない。
2. 超低温フリーザー (-80℃) 内で3時間静置する。(ここでの静置時間は30分程度延長しても保存には問題ない。3時間以内にはしない。)
   ※この間フリーザーの扉開閉を繰り返さないようにする。

保管

1. 二次冷却終了後、組織入りチューブをケーンに取り付け、直ちに液体窒素凍結保存容器に入れる。
   ※この時、組織入りチューブは蓋を持ち、保存溶液が入っている部分は絶対に触らない。