CultureSure™ CEPT Cocktail(1,000×)

• 농도 (HPLC): 합격
• 외관: 액체
• 엔도톡신: 3 EU/mL 미만
• 무균성 시험 완료
• 마이코플라스마 오염 음성 확인

사용 전 배지에 본 제품의 1/1,000 용량을 첨가하고 충분히 혼합하십시오.

사용 시 주의사항

• 본 제품은 냉동 상태(-20°C)로 보관해야 합니다. 반복적인 동결 및 해동을 방지하기 위해 소량으로 분주하여 냉동하는 것이 좋습니다.
• 재냉동 시에는 -80°C에서 보관하고, 내용물이 완전히 얼었음을 확인한 후 -20°C에서 보관하십시오.
• 용해 시 침전물이 보일 수 있습니다. 이는 제품의 품질에 영향을 미치지 않으며, 그대로 사용하셔도 됩니다.
  (37°C에서 1~2시간 동안 배양하면 침전물을 용해시킬 수 있으나, 반복적인 동결 및 가열은 피해야 합니다.)

예시:인간 배아 줄기세포, 인간 유도 만능 줄기세포

용도:

콜로니 형성 시험

인간 iPS 세포 201B7 계통을 bFGF가 포함된 StemSure^® hPSC Medium Δ 배지에 접종하고, CEPT 또는 Y-27632를 첨가한 후 37°C, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다(6-웰 플레이트, 1 웰= 9.5 cm²).
배양 시작 후 최소 16시간이 경과한 후, 배지를 CEPT 또는 Y-27632가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 2~3일마다 배지를 교체하며 배양을 계속했다.
8일째에 세포를 확인한 후, 4% 파라포름알데히드로 고정하고 ALP 염색을 실시한 뒤, 콜로니 수를 계수했다.

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단일 세포 클로닝 검사

인간 iPS 세포 201B7 계통을 bFGF가 포함된 StemSure^® hPSC Medium Δ 배지에 접종하고, CEPT 또는 Y-27632를 첨가한 후 37°C, 5% CO₂ 조건에서 배양했다(96웰 플레이트).
배양 시작 후 최소 16시간이 지난 후, 배지를 CEPT 또는 Y-27632가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 2~3일마다 배지를 교체하며 배양을 계속했다.
13일째에 세포를 확인한 후, 4% 파라포름알데히드로 고정하고 ALP로 염색한 다음, 콜로니가 형성된 웰과 형성되지 않은 웰의 수를 계수했다. 콜로니 형성률은 전체 웰 수 대비 콜로니가 형성된 웰의 수를 기준으로 계산하였다.

[결과]
접종된 세포 수가 적을 때, Y-27632를 첨가한 배양액보다 CEPT를 첨가한 배양액에서 더 많은 콜로니가 형성되었다.

미분화 상태 유지

• 세포: 인간 iPS 세포 201B7 계통
• 배지: StemSure^® hPSC 배지 Δ + 35 ng/mL bFGF
• 빨간색: rBC2LCN-635 (인간 iPSC 막 염색제)
• 파란색: DAPI (핵 염색제)
• 참고: BC2LCN은 인간 ES 세포 및 인간 iPS 세포의 세포 표면 당단백질에 대한 친화도가 높은 재조합 렉틴입니다.

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[결과]
CEPT와 Y-27632를 첨가했을 때 세포 형태에 차이가 관찰되지 않았습니다. 미분화 상태 또한 유지되었습니다.

세포 분화 시 콜로니 형성 시험

• 세포주: 인간 iPS 세포 253G4주
• 배지: StemSure^® hPSC 배지 Δ (40 ng/mL bFGF 함유)
• 코팅: Matrigel^® hESC-Qualified Matrix
• 접종 세포 수: 1,000개/웰（6웰 플레이트）
• 배양 기간: 7일
• 첨가제: 접종 시 Y-27632 또는 CEPT를 첨가했습니다. 다음 날부터는 첨가제 없이 배양했습니다.

[결과]
세포 분화 시 인간 iPS 세포를 Y-27632 배지 또는 CEPT가 첨가된 배지에 접종했습니다. 7일간 배양한 결과, CEPT가 첨가된 배지에서 Y-27632 배지보다 더 많은 콜로니가 형성되었습니다. 또한, 당사 제품은 타사 제품과 동일한 성능을 보였습니다.

동결 세포 해동 시 콜로니 형성 시험

• 세포주: 인간 iPS 세포 253G4주
• 배지: StemSure^® hPSC 배지 Δ (40 ng/mL bFGF 함유)
• 코팅: Matrigel^® hESC 인증 매트릭스
• 접종 세포 수: 1,000개/웰（6웰 플레이트）
• 배양 기간: 7일
• 첨가제: 접종 시 Y-27632 또는 CEPT를 첨가했습니다. 다음 날부터는 첨가 없이 세포를 배양했습니다.

[결과]
동결된 인간 iPS 세포를 해동하여 Y-27632 또는 CEPT가 첨가된 배지에 접종했습니다. 7일간 배양한 결과, Y-27632 배지보다 CEPT가 첨가된 배지에서 더 많은 콜로니가 형성되었습니다. 또한, 당사의 제품은 타사 제품과 동일한 성능을 보였습니다.

단일 세포 클로닝 효능

인간 iPS 세포를 96웰 플레이트의 각 웰에 단일 세포가 되도록 접종하고, 9일간 배양한 후 콜로니가 형성된 웰의 수를 계수했습니다.

• 세포주: 인간 iPS 세포 201B7주
• 배지: StemSure^® hPSC Medium Δ (35 ng/mL bFGF 함유)
• 코팅: Matrigel^® hESC-Qualified Matrix
• 접종 세포 수: 1세포/웰（96웰 플레이트）
• 배양 기간: 9일
• 첨가제: 접종 시 Y-27632 또는 CEPT를 첨가했습니다. 다음 날부터는 첨가제 없이 배양했습니다.

[결과]
CEPT 칵테일은 고스트레스 조건에서 탁월한 세포 보호 효과를 보였으며, 단일 세포 클로닝의 효율을 유의미하게 높였다.

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   A versatile polypharmacology platform promotes cytoprotection and viability of human pluripotent and differentiated cells.
2. Tristan, C.A. et al. : Stem Cell Reports, 16(12), 3076 (2021).
   Robotic high-throughput biomanufacturing and functional differentiation of human pluripotent stem cells.
3. Tristan, C.A. et al. : Nat. Protoc., 18(1), 58 (2022).
   Efficient and safe single-cell cloning of human pluripotent stem cells using the CEPT cocktail.
4. Deng, T. et al. : Stem Cell Reports, 18(4), 1030 (2023).
   Scalable generation of sensory neurons from human pluripotent stem cells.
5. Takeshi, W. et al. : Regen. Med., 18(3), 219 (2023).
   International evaluation study of a highly efficient culture assay for detection of residual human pluripotent stem cells in cell therapies.