MALBAC Single Cell WGA Kit

MALBACは指数関数的な増幅を行う従来のPCR法とは異なる全ゲノムDNA増幅法です。

MAKBACプライマーと独自の酵素により、鋳型ゲノムDNAにランダムにプライマーがアニーリングし、セミアンプリコンが生成されます。セミアンプリコンがさらに増幅される際、末端にプライマーと相補的な配列をもつ完全アンプリコンが生成され、この末端配列によりアンプリコンはループを形成します。これは次の増幅反応の鋳型にはなりません。

生成物はRT-PCRやマイクロアレイ、次世代シークエンスなどのアプリケーションに適用できます。

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• ループ型をとっているため次のDNA合成反応の鋳型にならない
  ⇒準線形型の増幅が可能に！！　(通常のPCRは指数関数的な増幅)

• 最少の増殖バイアスと最少のアレルドロップアウト率を伴った準線形増殖
• 簡便な実験プロセス (1チューブ、3ステップ、4時間)
• 高い増殖成功率 (95％以上)
• ATリッチ領域及びGCリッチ領域の両方で、再現性のある遺伝子座表示と一貫した増幅効率を実現
• 高いゲノムカバー率 (＜10％ 遺伝子座ドロップアウト)

• キット内容	10回用	50回用
  Cell Lysis Buffer	100 μL	300 μL
  Cell Lysis Enzyme	10 μL	30 μL
  Pre-Amp Buffer	300 μL	750 μL x 2
  Pre-Amp Enzyme Mix	10 μL	50 μL
  Amp Buffer	300 μL	750 μL x 2
  Amp Enzyme Mix	8 μL	40 μL

• 本キットの使用には下記も必要です (キットには含まれません)

  PCR thermal cycler	Micro Centrifuge
  PCR tubes	PBS buffer
  Dedicated pipette set	Vortex
  Filter pipette tips	Spectrophotometer
  Nuclease-free-water

最適な増殖サイクルにおいて、MALBAC Single Cell 全ゲノム増殖反応を行いました。単一の哺乳類細胞や同等の高品質なゲノムDNA 65 μLをサンプルとし反応させると、300-2,000bpに分布する2-4 μgの増殖DNAを生成します。

MALBAC Single Cell WGA Kitによる生成物は、様々な用途に使用可能です。

• アプリケーション例

  • サンガーシークエンス (点変異検出)
  • 一塩基多型(SNP)アレイ
  • SNP遺伝子型判定
  • 次世代シークエンス
  • リアルタイム qPCR
  • 分子クローニング
  • アレイCGH

• 適用分野例

  • バイオマーカー探索 (CNVs、SNVs)
  • 着床前スクリーニング(PGS)、着床前診断(PGD)
  • 遺伝子組み換え動物のジェノタイピング
  • がん幹細胞
  • 病原体解析

  etc.

MALBAC Single Cell WGA Kitでは様々なサンプルに適応しています。

サンプル例

• ゲノムDNA
• 培養細胞
• 血液(新鮮血/乾燥血液)
• 組織(凍結組織も含む)
• 精子
• 精液
• 卵母細胞
• 極体(卵子)

• サンプル量：0.5 pgまたは単一染色体～1 ngゲノムDNAまで幅広く適応