RNA Switch™

• 大規模装置が不要
• 抗体が不要
• 細胞へのダメージが少ない
• 大量の細胞処理が可能

RNA Switch™ ＝人工的に合成した ”mRNA”

人工mRNAであるRNAスイッチ™には「目的miRNAの相補的配列」と「蛍光タンパク質遺伝子(検出用)または自殺遺伝子(選別・除去用)」が組み込まれています。RNAスイッチ™が導入された細胞に目的miRNAが存在した場合はmRNA(RNAスイッチ™)は分解されます。一方、目的miRNAが存在しない場合はRNAスイッチ™に組み込まれた遺伝子が発現します。

選別の場合(左図参照)

不要な細胞

細胞内に目的miRNAが存在しない
↓
自殺遺伝子が発現(スイッチON)
↓
アポトーシス(細胞死)誘導

必要な細胞

細胞内の目的miRNAが結合
↓
自殺遺伝子の発現を抑制(スイッチOFF)
↓
RNAスイッチ™(mRNA)は24h程度で分解

CM purifier RNA Switch™ (#P-0004)とpuro resistant mRNA™ (#P-0007)をヒト心筋細胞を含む細胞集団に共導入することで、セルソーター/抗体を用いた従来法に比べて、高純度・低コストで大量のヒト心筋細胞を精製できます。

• セルソーター		RNA Switch™
  高額装置が必要	→	特別な機器は不要
  抗体の有無・性能に依存	→	抗体不要
  細胞へのダメージ(流速・低pH)	→	細胞へのダメージ少ない
  処理できる細胞数が少ない	→	大量処理が可能

• 
  
  
  

  セルソーターの課題を解決

アプリケーションデータ

プロトコル概要

• Day 0	播種：6ウェルプレート、8.0-10.0 x 105 細胞/ウェル ↓ インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間)
  Day 1	培地交換 ↓ インキュベート：37℃および5％CO2(1-2時間) ↓ 試薬準備、トランスフェクション* ↓ インキュベート：37℃、5％CO2 (4時間) ↓ 培地交換(2 μg / mL ピューロマイシン入り) ↓ インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間)

• Day 2	培地交換(2 μg / mL ピューロマイシン入り) ↓ インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間)
  Day 3	解析：顕微鏡またはc-TnT FACS

  *CM purifier RNA Switch™ (#P-0004)と一緒に puro resistant mRNA™ (#P-0007)もトランスフェクションすることで選別率を高めます。

  

iPSC eliminator RNA Switch™ (#P-0006)は、ヒト多能性幹細胞で特異的に高い活性が見られるmiR-302の活性に応じてピューロマイシン耐性遺伝子の発現を制御することで、ヒトiPS細胞のみを特異的に除去することが可能です。

アプリケーションデータ：iPS細胞除去前後の比較

#P-0006 iPSC eliminator RNA Switch™

CM detector RNA Switch™ (#P-0002)、iPSC detector RNA Switch™ (#P-0003)は心筋細胞、ヒトiPS細胞以外の不要な細胞を蛍光検出することが可能です。 RNA Switch™の細胞への導入効率を検討するのにおすすめです。コントロールとして、Control detector RNA Switch™(P-0001)を合わせてご使用ください。

アプリケーションデータ

1製品は何回用ですか

おおよそ6ウェルプレート3枚分です。本品の容量は 9 μg/tubeであり、6ウェルプレートの場合、5 x 10⁵ cells/wellで細胞を播種する際に 0.5 μg/wellのRNA Switch™を使用します。

細胞に導入したRNA Switch™ はいつまで残りますか

24時間で消失します。

エレクトロポレーション法によるトランスフェクションは可能ですか

可能です。

RNA Switch™ のご購入に関しては事前にユーザー様を確認させていただいております。
お手数ですが、下記URLより使用承諾書フォーマットをダウンロードいただき、必要事項をご記入の上、当社または販売代理店へお渡しください。

使用承諾書