aceRNA Technologies社 RNA Switch™
特長
- 大規模装置が不要
- 抗体が不要
- 細胞へのダメージが少ない
- 大量の細胞処理が可能
原理
RNA Switch™ ＝人工的に合成した ”mRNA”
人工mRNAであるRNAスイッチ™には「目的miRNAの相補的配列」と「蛍光タンパク質遺伝子(検出用)または自殺遺伝子(選別・除去用)」が組み込まれています。RNAスイッチ™が導入された細胞に目的miRNAが存在した場合はmRNA(RNAスイッチ™)は分解されます。一方、目的miRNAが存在しない場合はRNAスイッチ™に組み込まれた遺伝子が発現します。
選別の場合(左図参照)
不要な細胞
細胞内に目的miRNAが存在しない
↓
自殺遺伝子が発現(スイッチON)
↓
アポトーシス(細胞死)誘導
必要な細胞
細胞内の目的miRNAが結合
↓
自殺遺伝子の発現を抑制(スイッチOFF)
↓
RNAスイッチ™(mRNA)は24h程度で分解
RNAスイッチ製品一覧
-
RNAスイッチの構造
(人工mRNA) -
| ターゲット 細胞 |
目的 | 必要な製品 | 機能 | miRNAの相補配列 | レポーター遺伝子 | 結果 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 製造元コード | 製品名 | ||||||
| 心筋・iPS細胞 | 導入効率のチェック | P-0001 | Control detector RNA Switch™ | 導入効率を調べる | なし | 蛍光タンパク質 遺伝子 |
|
| 心筋細胞 | 検出 | P-0001 | Control detector RNA Switch™ | コントロール(すべての細胞を光らせる) | なし | 蛍光タンパク質 遺伝子 |
コントロールと比較することで、不要な細胞がどの程度存在するかわかる。 |
| P-0002 | CM detector RNA Switch™ | 心筋細胞以外を光らせる | miR-1 | 蛍光タンパク質 遺伝子 |
|||
| iPS細胞 | 検出 | P-0001 | Control detector RNA Switch™ | コントロール(すべての細胞を光らせる) | なし | 蛍光タンパク質 遺伝子 |
同上 |
| P-0003 | iPSC detector RNA Switch™ | iPS細胞以外を光らせる | miR-302 | 蛍光タンパク質遺伝子 | |||
| 心筋細胞 | 選別 (心筋細胞以外を殺す) |
P-0004 | CM purifier RNA Switch™ | 心筋細胞以外を殺す | miR-1 (心筋細胞特異的) |
自殺遺伝子 | 生き残る細胞： ①P-0004とP-0007が導入された心筋細胞 ②P-0004が導入されず、P-0007が導入された細胞(ほとんど存在しない) |
| P-0007 | puro resistant mRNA™ | P-0007が導入されなかった細胞をピューロマイシンによりすべて殺す | なし | ピューロマイシン 耐性遺伝子 |
|||
| - | ピューロマイシン | - | - | ||||
| iPS細胞 | 除去 (iPSCを殺す) |
P-0006 | iPSC eliminator RNA Switch™ | iPS細胞を殺す(P-0007由来ピューロマイシン耐性遺伝子の発現を妨害) | miR-302 (iPSC特異的) |
ピューロマイシン 耐性遺伝子 |
iPS細胞のみを除去する。 |
用途① 「選別」 (#P-0004 CM purifier RNA Switch™)
CM purifier RNA Switch™ (#P-0004)とpuro resistant mRNA™ (#P-0007)をヒト心筋細胞を含む細胞集団に共導入することで、セルソーター/抗体を用いた従来法に比べて、高純度・低コストで大量のヒト心筋細胞を精製できます。
-
セルソーター
RNA Switch™
高額装置が必要 → 特別な機器は不要 抗体の有無・性能に依存 → 抗体不要 細胞へのダメージ(流速・低pH) → 細胞へのダメージ少ない 処理できる細胞数が少ない → 大量処理が可能
セルソーターの課題を解決
アプリケーションデータ
プロトコル概要
-
Day 0 播種：6ウェルプレート、8.0-10.0 x 105 細胞/ウェル
↓
インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間)Day 1 培地交換
↓
インキュベート：37℃および5％CO2(1-2時間)
↓
試薬準備、トランスフェクション*
↓
インキュベート：37℃、5％CO2 (4時間)
↓
培地交換(2 μg / mL ピューロマイシン入り)
↓
インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間) -
Day 2 培地交換(2 μg / mL ピューロマイシン入り)
↓
インキュベート：37℃および 5％CO2 (24時間)Day 3 解析：顕微鏡またはc-TnT FACS *CM purifier RNA Switch™ (#P-0004)と一緒に puro resistant mRNA™ (#P-0007)もトランスフェクションすることで選別率を高めます。
用途② iPS細胞の「除去」 (#P-0006 iPSC eliminator RNA Switch™)
iPSC eliminator RNA Switch™ (#P-0006)は、ヒト多能性幹細胞で特異的に高い活性が見られるmiR-302の活性に応じてピューロマイシン耐性遺伝子の発現を制御することで、ヒトiPS細胞のみを特異的に除去することが可能です。
アプリケーションデータ：iPS細胞除去前後の比較
#P-0006 iPSC eliminator RNA Switch™
用途③ 各種細胞の「検出」 (#P-0002, #P-0003)
CM detector RNA Switch™ (#P-0002)、iPSC detector RNA Switch™ (#P-0003)は心筋細胞、ヒトiPS細胞以外の不要な細胞を蛍光検出することが可能です。 RNA Switch™の細胞への導入効率を検討するのにおすすめです。コントロールとして、Control detector RNA Switch™(P-0001)を合わせてご使用ください。
アプリケーションデータ
Q&A
1製品は何回用ですか
おおよそ6ウェルプレート3枚分です。本品の容量は 9 μg/tubeであり、6ウェルプレートの場合、5 x 105 cells/wellで細胞を播種する際に 0.5 μg/wellのRNA Switch™を使用します。
細胞に導入したRNA Switch™ はいつまで残りますか
24時間で消失します。
エレクトロポレーション法によるトランスフェクションは可能ですか
可能です。
製品一覧
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- 掲載内容は本記事掲載時点の情報です。仕様変更などにより製品内容と実際のイメージが異なる場合があります。
- 掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
- 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
- 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。