通常の培地に添加するだけ! 「三次元培養培地の調製」「MSCの機能改善」に!

日産化学 FCeM® Advance Preparation Kit

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FCeM® Advance Preparation Kit は、新規ポリマー"FP003"を培地に添加するだけで、任意の培地から三次元培養用培地が作製できるキットです。"FP003"は細胞を均一に浮遊・分散させる機能を持ち、浮遊・分散したシングルセルはスフェロイドを形成します。さらに本キットは従来品に比べて、細胞の回収性を大幅に向上させました。

また、本製品を使用することで、間葉系幹細胞の生存率 (非凍結) および、細胞機能 (未分化能・分泌因子の産生量) が向上します。

特長

  • 培地に添加するだけで、任意の培地から三次元培養用培地が作製可能
  • 細胞を浮遊・分散させるため、スフェロイドの大量培養が可能
  • 付属の回収剤 (Harvesting Buffer) を使用すれば、温和な遠心分離 (100~300 x g) でスフェロイドはもちろん、シングルセルも簡単に回収
  • 粘性は水と同等なので、化合物の添加・混合も容易

原理

培地作製プロトコール

細胞回収プロトコール

FCeM® Advance Preparation Kitはスフェロイドはもちろん、これまで回収の難しかったシングルセルでも300 x gで100%近く回収できます。

【評価条件】

  1. FCeM® Advance Preparation Kitを0.009%含む三次元培養培地でJurkat細胞を4日間培養
  2. 細胞懸濁液10 mLに対し、回収液を1 mL添加
  3. セルストレーナーで細胞を均一化
  4. 遠心分離 (300 x g, 5分間)
  5. 下部10%の細胞を回収し、回収率を測定

間葉系幹細胞の「非凍結保存」と「プライミング効果*」

間葉系幹細胞は、接着培養増殖による未分化性などの細胞機能の低下が課題

本製品を用いた三次元・浮遊培養で、低下した間葉系幹細胞の機能を改善

  • 表面マーカー維持・未分化能向上 (FACS, mRNA)
  • 2週間以上の室温保存 (培地交換なし)
  • 分泌因子の産生量UP (TSG-6)

*プライミング効果:細胞機能を向上・活性化させる刺激

間葉系幹細胞のプライミング方法

① 現在の培養方法を用いて必要数まで細胞を増殖
② FCeM®培地へ置換
③ 室温 (インキュベーター不要) で1-2週間保管

  • 未分化マーカーの発現量が向上 (OCT4, Nanog)
  • 生存率の向上 (室温/培地交換なしで2週間)
  • 抗炎症作用が向上 (分泌因子TSG-6の産生量UP)

FCeM®シリーズ関連論文

No. Application Target Type of
Polymer
Description Year Citation
1 Large Scale Culture KhES-1,H9,253G1 FP001 Large scale culture of human pluripotent stem cells 2014 Otsuji TG, Bin J, Yoshimura A, Tomura M, Tateyama D, Minami I, Yoshikawa Y, Aiba K, Heuser JE, Nishino T, Hasegawa K, Nakatsuji N. A 3D sphere culture system containing functional polymers for large-scale human pluripotent stem cell production. Stem Cell Reports. 2014 Apr 24;2(5):734-45
Chicken primordial germ cells(cPGCs) FP003 Three-dimensional (3D) culture of cPGCs 2018 Chen YC, Chang WC, Lin SP, Minami M, Jean C, Hayashi H, Rival-Gervier S, Kanaki T, Wu SC, Pain B. Three-dimensional culture of chicken primordial germ cells (cPGCs) in defined media containing the functional polymer FP003. PLoS One. 2018 Sep 21;13(9):e0200515.
2 3D Drug Screening Assay Rabbit Smooth Muscle Cell FP001 Study of the viability of smooth muscle cells 2017 Natori T, Fujiyoshi M, Uchida M, Abe N, Kanaki T, Fukumoto Y, Ishii I. Growth arrest of vascular smooth muscle cells in suspension culture using low-acyl gellan gum. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2017 Mar;53(3):191-198.
HCC78 cells FP001 Difference of certain gene (ROS1) expression between 2D and 3D culture. 2018 Gong B, Oh-Hara T, Fujita N, Katayama R. 3D culture system containing gellan gum restores oncogene dependence in ROS1 rearrangements non-small cell lung cancer. Biochem Biophys Res Commun. 2018 Jun 22;501(2):527-533.
A549, HepG2, SKOV3 FP001 Sensititiy of cancer cells to anticancer agents under 3D culture 2016 Aihara A, Abe N, Saruhashi K, Kanaki T, Nishino T. Novel 3-D cell culture system for in vitro evaluation of anticancer drugs under anchorage-independent conditions. Cancer Sci. 2016 Dec;107(12):1858-1866.
T. equiperdum IVM-t1 strain. FP001 Drug screening assay constructed with FP001 polymer 2017 Suganuma K, Yamasaki S, Molefe NI, Musinguzi PS, Davaasuren B, Mossaad E, Narantsatsral S, Battur B, Battsetseg B, Inoue N. The establishment of in vitro culture and drug screening systems for a newly isolated strain of Trypanosoma equiperdum. Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 2017 Aug;7(2):200-205
3 Cell Preservation Liver-derived cells (Human Hepatocytes and HepG2) FP001 Comparison of cryopreservation induced damage of liver-derived cells under 2D and 3D culture 2018 Yukie Kuroda, Su-ryang Kim, Tatsuro Kanaki, Masato Horikawa, Yuko Sekino, Seiichi Ishida, Suspension Culture Improves Cryopreservation- induced Damage of Liver-derived Cells, Alternatives to Animal Testing and Experimentation, 2016, Volume 21, Issue 2, Pages 63-70.
4 Cell features under 3D culture Mouse Cortical Neurons FP001 Maturational characterization of mouse cortical neurons under 3D culture 2019 Nakamichi N, Matsumoto Y, Kawanishi T, Ishimoto T, Masuo Y, Horikawa M, Kato Y. Maturational Characterization of Mouse Cortical Neurons Three-Dimensionally Cultured in Functional Polymer FP001-Containing Medium. Biol Pharm Bull. 2019;42(9):1545-1553.
HepaRG (hepatoma-derived cell line) FP001 Study the in vivo differentiation ability of HepaRG in 2D and 3D culture. 2016 Higuchi Y, Kawai K, Kanaki T, Yamazaki H, Chesné C, Guguen-Guillouzo C, Suemizu H. Functional polymer-dependent 3D culture accelerates the differentiation of HepaRG cells into mature hepatocytes. Hepatol Res. 2016 Sep;46(10):1045-57.
HCT116 and HT29 cells FP001 The relationship between of 3D architecture of cancer spheroids and the progression of malignancy. 2018 Piulats JM, Kondo J, Endo H, Ono H, Hagihara T, Okuyama H, Nishizawa Y, Tomita Y, Ohue M, Okita K, Oyama H, Bono H, Masuko T, Inoue M. Promotion of malignant phenotype after disruption of the three-dimensional structure of cultured spheroids from colorectal cancer. Oncotarget. 2018 Mar 23;9(22):15968-15983.
Muscle Stem
Progenitor cells (SMPCs) derived from iPS cells
FP001 Gene expression (PAX7, TRAF6...) of SMPCs under microgravity environment constructed with FP polymer. 2017 Hosoyama T, Ichida S, Kanno M, Ishihara R, Hatashima T, Ueno K, Hamano K. Microgravity influences maintenance of the human muscle stem/progenitor cell pool. Biochem Biophys Res Commun. 2017 Nov 18;493(2):998-1003.
5 others A. thaliana T87 strain FP003 Bioluminescent detection of 3D cell suspension 2020 Furuhata Y, Sakai A, Murakami T, Nagasaki A, Kato Y. Bioluminescent imaging of Arabidopsis thaliana using an enhanced Nano-lantern luminescence reporter system. PLoS One. 2020 Jan 3;15(1):e0227477.
Type of polymer

FP001 : FCeM® Preparation Kit
FP003 : FCeM® Advance Preparation Kit

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三次元培養用培地 FCeM®シリーズ

三次元培養用培地作製試薬 SphereMax™

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